Laser Capture Microdissection av däggdjur

Abstract

Laser fånga mikroskopi, även känd som laser microdissection (LMD), gör att användaren kan isolera ett litet antal celler eller vävnader från frysta eller formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. LMD tekniker förlitar sig på en termo instabilt membran placeras antingen ovanpå eller under, vävnaden avsnittet. I en metod är fokuserad laser energi för att smälta membranet på de underliggande cellerna, som sedan kan lyftas ut ur vävnaden avsnitt. I den andra, förångas lasern energi folien längs en bana "dras" på vävnaden, vilket gör att de markerade cellerna att falla in i en samling enhet. Varje teknik möjliggör val av celler med en minsta upplösning på flera mikrometer. DNA, RNA, protein, och prover lipid kan isoleras och analyseras från mikro dissekeras-prover. I denna video visar vi användning av Leica AS-LMD laser microdissection instrument i sju segment, bland annat en introduktion till principerna för LMD, initiering instrumentet för användning, allmänna överväganden för provberedning, montering provet och inrätta fånga rör , rikta in mikroskop, justera fånga kontroller och fånga vävnadsprover. Laser-capture mikro-dissektion kan utredaren att isolera prov på rena cellpopulationer så liten som några cell-ekvivalenter. Detta gör att analysen av celler av intresse som är fria från angränsande föroreningar, vilket kan förvirra experimentella resultat.