Microfabricated Post-Dizi-Dedektörleri (mPADs): Mekanik Kuvvetleri yalıtın bir Yaklaşım
Summary
Bu video, hücresel kontraktilite modülasyon değerlendirmek için microfabricated sonrası dizi dedektörleri (mPADs) imal ve nasıl kullanılacağını göstermektedir.
Abstract
Bu video, mesaj microfabricated bir dizi kullanarak hücresel çekiş kuvvetleri ölçmek için bir yaklaşım sunacak. Çekiş güçleri miyozin aktin etkileşimleri ile üretilen ve bizim fizyolojisinde önemli bir rol oynamaktadır. Gelişimi sırasında, hücrelerin doku erken yapıları oluşturmak için bir yerden amacıyla önümüzdeki geçmek için olanak sağlar. Çekiş güçleri iyileşme süreçlerine yardımcı olur. Bunlar doğru yaraların kapatılması ya da vücuda göç ve lökositlerin sürünerek için gerekli. Bu aynı güçler kanser metastazı ya da vasküler bir tümör doğru büyüme durumda sağlığımız için zararlı olabilir. Hücreleri in vitro olarak incelemek için en yaygın yöntem, bir cam veya polistiren çanak kullanmak olmuştur. Ancak, yüzeylerde katılık imkansız fiziksel hücre çekiş kuvvetleri ölçmek için yapar, ve çekiş güçleri çalışma nispeten birkaç yöntem vardır. Bizim laboratuvar, bu sınırlamaları aşmak için bir teknik geliştirdi. Bu yöntem, tek tek hücrelerin birçok konsol yayılmış ve bu süreç içinde onları saptırmak gibi esnek olan konsol, sertlik ve büyüklük ölçeği dikey bir dizi dayanmaktadır. Biz kullanmak sütunlar, çapı 3 mm, 10 mm boyunda, ve 9 mm merkez-merkez aralığı ile düzenli bir dizi yapılandırılır. Ama bu fiziksel boyutları çeşitli çalışmalarda kolayca uyum sağlamak için çeşitli olabilir. Biz bir silikon ana ile başlar, ancak son mesaj silikon kauçuk poli (dimetil siloksan) veya PDMS adlı yapılmış. Biz mikroskop altında deplasmanlar ölçmek ve gözlemlenen deplasmanlar üretmek için gerekli çekiş güçleri büyüklüğünü ve yönünü hesaplayabilirsiniz. Biz bu yüzeylerin post-dizi-dedektörleri, ya da mPADs microfabricated diyoruz. Burada, biz mPADs imal ve hücresel kontraktilite modülasyon değerlendirmek için nasıl kullandıklarını size gösterecektir.
Protocol
References
- Tan, J. L., Tien, J., Pirone, D., Gray, D. S., Chen, C. S. Cells lying on a bed of microneedles: An approach to isolate mechanical force. Proc Nat Acad Sci USA. 100, 1484-1489 (2003).
- Sniadecki, N. J., Chen, C. S., Wang, Y. L., Discher, D. E. Microfabricated Silicone Elastomeric Post Arrays for Measuring Traction Forces of Adherent Cells. Methods in Cell Biology – Cell Mechanics. 83, 313-328 (2007).
- Lemmon, C. A., Sniadecki, N. J., Ruiz, S. A., Tan, J. T., Romer, L. H., Chen, C. S. Shear Force at the Cell-Matrix Interface: Enhanced Analysis For Microfabricated Post Array Detectors. Mechanics & Chemistry of Biosystems. 2, 1-16 (2005).
