चूहे में intracranial xenograft अध्ययन के लिए एक सरल गाइड भाड़ विधि
Summary
आदेश में glioma के उपचार के लिए उपन्यास चिकित्सकीय मानदंड का मूल्यांकन करने के लिए, शारीरिक प्रासंगिक मॉडल आवश्यक हैं. हम intracranial xenograft मॉडल है कि अधिक तेजी से और stereotactic दृष्टिकोण से सुरक्षित है की स्थापना के लिए एक implantable गाइड पेंच प्रक्रिया का उपयोग.
Abstract
immunosuppressed चूहों के मस्तिष्क में मानव ट्यूमर कोशिकाओं की कलम बांधने का काम (glioma) glioblastoma और medulloblastoma सहित मस्तिष्क के कैंसर के अध्ययन के लिए एक स्थापित तरीका है. व्यापक रूप से इस्तेमाल किया stereotactic दृष्टिकोण केवल एक समय में एक ही पशु के इंजेक्शन के लिए अनुमति देता है, श्रम गहन और अति विशिष्ट उपकरणों की आवश्यकता है. गाइड पेंच विधि, शुरू में लाल एट अल, 1 द्वारा विकसित बोझिल stereotactic प्रक्रियाओं को समाप्त करने के लिए विकसित किया गया था. अब हम एक संशोधित गाइड पेंच दृष्टिकोण है कि तेजी से और असाधारण रूप से सुरक्षित है वर्णन है, जो दोनों के महत्वपूर्ण नैतिक विचार कर रहे हैं. विशेष रूप से, हमारे प्रक्रिया अब एक जलसेक पंप है कि 10 के लिए एक साथ ट्यूमर कोशिकाओं के इंजेक्शन के साथ किया जा जानवरों करने के लिए अनुमति देता है शामिल हैं.
एक पूरी तरह से मानव एंटीबॉडी HGF / स्कैटर कारक वर्तमान में नैदानिक मूल्यांकन 2-5 के दौर से गुजर के लिए निर्देशित, इस प्रक्रिया की उपयोगिता का प्रदर्शन करने के लिए, हम चूहों में intracranial xenografts है, जो तब AMG102 साथ इलाज किया गया के रूप में मानव U87MG glioma कोशिकाओं की स्थापना की. AMG102 के प्रणालीगत इंजेक्शन काफी intracranial U87MG xenografts के साथ सभी चूहों के अस्तित्व लंबे समय तक और पूरा इलाज की एक संख्या में हुई.
यह अध्ययन यह दर्शाता है कि गाइड पेंच विधि intracranial xenografts की स्थापना के लिए एक सस्ती, अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य दृष्टिकोण है. इसके अलावा, यह मस्तिष्क के कैंसर के उपचार के लिए उपन्यास चिकित्सात्मक रणनीतियों के मान्य के लिए एक प्रासंगिक शारीरिक मॉडल उपलब्ध कराता है.
Protocol
Discussion
intracranial गाइड पेंच विधि यहाँ प्रस्तुत intracranial xenografts के तेजी से और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य स्थापना के लिए सक्षम बनाता है और एक प्रशिक्षित पशु तकनीशियन के हाथों में, इस प्रक्रिया को बहुत आसानी से एक stereotactic डिवाइस के लिए जरूरत के बिना किया जाता है. हमारी विधि एक गाइड पेंच के प्रयोग को जोड़ती है, के लिए सही vivo ट्यूमर के विकास के लिए सबसे उपयुक्त मस्तिष्क के क्षेत्र, और एक स्वचालित जलसेक पंप है कि 10 पशुओं के लिए एक साथ एक समय में की टीका के लिए अनुमति देता है का पता लगाने. गाइड पेंच वृद्धि प्रक्रिया प्रदर्शन करने के लिए कम से कम 5 मिनट लगते हैं. 30 μl / घंटे में कक्षों की स्वचालित जलसेक एक 5 μl मात्रा के लिए सिर्फ 10 मिनट लगते हैं. यह एक निरंतर दर पर सटीक dosing सुनिश्चित करता है और अतिरिक्त कपाल बढ़ intracranial दबाव के कारण क्षेत्र में सेल के निष्कासन के जोखिम को कम कर देता है. हम भी 10 μl संस्करणों के साथ इस कार्यविधि का प्रदर्शन और किसी भी अतिरिक्त कपाल ट्यूमर सेलुलर भाटा के कारण विकास मनाया नहीं. स्वचालित जलसेक पंप के रूप में भी कई जानवरों के साथ inoculated हम एक stereotactic प्रक्रिया है जो प्रति घंटे लगभग 15 पशुओं के लिए सीमित है की तुलना में प्रति घंटे 60 पशुओं को इंजेक्षन कर सकते हैं अनुमति देता है.
इस प्रक्रिया में सबसे महत्वपूर्ण कदम गाइड पेंच में खोपड़ी का स्थान है, के रूप में अपनी स्थिति के ट्यूमर के थोक के अंतिम स्थान निर्धारित करता है. यदि पुस्तिका पेंच भी केंद्रीय है, कोशिकाओं अगर पुस्तिका आगे तक रखा गया है जबकि दो मस्तिष्क गोलार्द्धों के बीच एक क्षेत्र में अंतःक्षिप्त किया जाएगा, कोशिकाओं को मस्तिष्क में बिल्कुल नहीं इंजेक्शन जाएगा. इसलिए यह आवश्यक है गाइड के पार्श्व 2.5 मिमी और 1 मिमी 1 शीर्षस्थान के लिए पूर्वकाल का पता लगाने में यथासंभव सही हो. इस अध्ययन में हम एक इस्पात गाइड पेंच का इस्तेमाल किया, हालांकि प्लास्टिक गाइड शिकंजा भी उन अध्ययनों कि जैसे एमआरआई या पीईटी 6 मस्तिष्क इमेजिंग की आवश्यकता के लिए उपलब्ध हैं. यहां तक कि अगर स्वचालित जलसेक पंप कुछ समूहों के लिए लागत अधिक बैठती है, कोशिकाओं को अभी भी मैन्युअल रूप से अधिक stereotactic दृष्टिकोण से जल्दी इंजेक्शन जा सकता है. कुल मिलाकर, इस तेजी से, सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विधि glioma medulloblastoma, और मस्तिष्क स्टेम ट्यूमर 7 का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इस प्रक्रिया अप्रत्याशित संवेदनाहारी प्रतिक्रियाओं (<1%) के कारण होने वाली मौतों के साथ हमारे दो प्रयोगशालाओं के बीच 500 से अधिक चूहों के पर प्रदर्शन किया गया है. चूहों कि गाइड पेंच के साथ bolted रहे थे और बाद में संचार के साथ कोशिकाओं को मरने या नहीं पीड़ित था प्रक्रिया का एक परिणाम के के रूप में किसी भी न्यूरोलॉजिकल जटिलताओं. पशु पिछले 100 दिनों किसी भी जटिलताओं के बिना बच गया है. हालांकि हम SCID की तरह बालों के साथ एक गंजा माउस, माउस इम्युनो – समझौता का उपयोग करना बस के रूप में उपयुक्त प्रदान की खोपड़ी बाल सर्जरी से पहले हटा दिया गया था साइट को साफ रखने और गाइड पेंच के साथ हस्तक्षेप बालों को रोकने होगा.
वहाँ कई उपन्यास चिकित्सा वर्तमान में 8-10 glioma के उपचार के लिए विकसित किया जा रहा हैं. हाल ही में हम पता चला है कि चमड़े के नीचे U87MG glioma xenografts से हिचकते 3 AMG102 के साथ इलाज किया जा सकता है, एक humanized प्रतिरक्षी वर्तमान में 5 glioma में नैदानिक मूल्यांकन के दौर से गुजर HGF करने के लिए निर्देशित. हम प्रयोग किया जाता विधि यहाँ का वर्णन करने के लिए नग्न चूहों के दिमाग में intracranial U87MG ट्यूमर स्थापित. हमारे अध्ययन से स्पष्ट रूप से विधि की उपयोगिता को दर्शाता है और यह दर्शाता है कि AMG102 काफी orthotopic U87MG xenografts के विकास को रोकता है. हम इस मॉडल का उपयोग निर्धारित करने के लिए क्या अन्य चिकित्सा AMG102 साथ संयोजन में उपयोग किया जा सकता है ट्यूमर के विकास की अधिक प्रभावी अवरोध प्राप्त करने के लिए जारी रहेगा.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों के लिए इस मॉडल को विकसित करने में सहायता के लिए Verlene हेनरी और लिंडसे होम्स का शुक्रिया अदा करना होगा. इस काम आंशिक रूप से जेम्स एस McDonnell फाउंडेशन (220020173 #) द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| DMEM/F12 | Invitrogen | 12634010 | |
| FCS | Bovogen | SFBS | |
| Trypsin | Invitrogen | 15050065 | |
| EDTA | Sigma | E6758 | |
| Balb/c nu/nu mice | ARC Perth | ||
| Screw Holder | Plastics One | SD-1 | |
| Drill Holder | Plastics One | DH-1 | |
| Drill Bit | Plastics One | D#60 | |
| Screw guide (metal) | Plastics One | C212SG | |
| Screw Dummy (stylus) | Plastics One | C212SD | |
| Hamilton Syringe (10 μl 26g cemented needle) | Grace Division Discovery Science | 80075 | |
| PHD 22/2000 infusion pump | Harvard Apparatus | 70-2003 | Optional |
| Vetbond | 3M | 1469SB | |
| Thermo pad | Harvard Apparatus | 340390 |
References
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