मानव pluripotent स्टेम सेल (hPSCs) असंख्य विभिन्न रोगों के इलाज की क्षमता है. इन कोशिकाओं की उपयोगिता तथ्य यह है कि वे शरीर में किसी भी सेल प्रकार में अंतर कर सकते हैं में निहित है. यहाँ हम teratoma परख, जो लिए hPSCs की pluripotence का प्रदर्शन करने के लिए प्रयोग किया जाता है का वर्णन.
Pluripotent स्टेम सेल (PSCs) अद्वितीय विशेषता है कि वे सभी तीन परतों से रोगाणु कोशिकाओं में अंतर कर सकते है. यह उन्हें कई विभिन्न रोगों के उपचार के लिए एक संभावित महत्वपूर्ण उपकरण है. प्रेरित pluripotent स्टेम कोशिकाओं (IPSCs) और मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के साथ जारी रखने के अनुसंधान के आगमन के साथ (hESCs) assays कि प्रदर्शित कर सकते हैं कि एक विशेष सेल लाइन है pluripotent है के लिए एक की जरूरत है. Germline प्रसारण माउस भ्रूणीय स्टेम सेल (mESC) लाइनों 1,2,3 की pluripotence प्रदर्शन के लिए स्वर्ण मानक कर दिया गया है. इस परख का प्रयोग, शोधकर्ताओं ने दिखा सकते हैं कि एक mESC लाइन सहित भ्रूण रोगाणु 4 कोशिकाओं में सभी प्रकार की कोशिकाओं कर सकते हैं. मानव ईएससी 5,6 लाइनों की पीढ़ी के साथ, उपयुक्त परख के लिए इन कोशिकाओं की pluripotence साबित स्पष्ट नहीं था के बाद से मानव ESCs germline प्रसारण के लिए के परीक्षण नहीं किया जा सकता है. एक किराए के रूप में, teratoma परख वर्तमान pluripot प्रदर्शित करने के लिए प्रयोग किया जाता हैमानव pluripotent स्टेम सेल ency (hPSCs) के 7,8,9. हालांकि इस परख हाल ही में जांच के दायरे में आ गया है और नई प्रौद्योगिकियों को सक्रिय रूप से पता लगाया जा रहा है, teratoma परख वर्तमान सोने 7 मानक है. इस परख में, प्रश्न में कोशिकाओं को एक प्रतिरक्षा समझौता माउस में इंजेक्ट कर रहे हैं. यदि कोशिकाओं है pluripotent हैं, एक teratoma अंततः विकास और ट्यूमर के वर्गों के सभी तीन रोगाणु 10 परतों से ऊतकों को दिखा देंगे. Teratoma परख में, hPSCs के माउस के विभिन्न क्षेत्रों में अंतःक्षिप्त किया जा सकता है. या पैर या तो subcutaneously या intramuscularly 11 में, सबसे आम इंजेक्शन साइटों वृषण कैप्सूल, गुर्दे कैप्सूल, जिगर में शामिल हैं. यहाँ हम ट्यूमर के विकास के लिए साइट के रूप में वृषण कैप्सूल का उपयोग hPSCs से teratomas की पीढ़ी के लिए एक मजबूत प्रोटोकॉल का वर्णन.
यहाँ प्रस्तुत विधि वृषण कैप्सूल में hPSCs से teratomas पैदा करने के एक अत्यंत विश्वसनीय, सीधा मतलब है प्रदान करता है. इस तकनीक में कई महत्वपूर्ण मानकों हैं. विशेष रूप में, यह महत्वपूर्ण है कि एक नियंत्रण के रूप में है pluripotent हो जाना जाता है hPSC सेल लाइनों इंजेक्षन. अन्य महत्वपूर्ण पैरामीटर इंजेक्शन और ट्यूमर अवलोकन के बीच समय अंतराल शामिल हैं. WA09 तरह सेल लाइनों के लिए, teratomas 6-8 सप्ताह में मनाया जाना चाहिए. हम नई iPSC लाइनों के लिए लगता है कि अक्सर 10 सप्ताह की आवश्यकता है. एक और चिंता का विषय इंजेक्शन कोशिकाओं की संख्या है. हम एक मिलियन कोशिकाओं इंजेक्षन लेकिन परख आसानी से कम कोशिकाओं के साथ किया जा सकता है. इसके अलावा, इंजेक्शन मध्यम महत्वपूर्ण है. हम पाते हैं कि हम सबसे अच्छा परिणाम प्राप्त जब कोशिकाओं Matrigel और DMEM/F-12 की एक 1:1 मिश्रण में इंजेक्ट कर रहे हैं, के रूप में से पीबीएस या DMEM/F-12 करने के लिए विरोध किया.
The authors have nothing to disclose.
यह काम सीआईआरएम # TR-1250 अनुदान, RT1 – +०११०८, और CL1 00,502 द्वारा वित्त पोषित किया गया.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Accutase | Invitrogen | A1110501 |
DMEM/F-12 | Invitrogen | 113300-032 |
Matrigel | BD Biosciences | 354277 |