אדם בתאי גזע pluripotent (hPSCs) יש פוטנציאל לטפל מספר עצום של מחלות שונות. השירות של תאים אלה הוא בכך שהם יכולים להתמיין לכל סוג תא בגוף. כאן אנו מתארים את assay תפלצת רוחנית, אשר משמש כדי להדגים את pluripotence של hPSCs.
בתאי גזע pluripotent (PSCs) יש מאפיין ייחודי כי הם יכולים להתמיין לתאים מכל שלוש שכבות הנבט. זה גורם להם להיות כלי רב ערך פוטנציאלית לטיפול במחלות שונות. עם כניסתו של המושרה בתאי גזע pluripotent (iPSCs) ומחקר המשך בתאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) יש צורך מבחני זה יכול להוכיח כי קו מסוים הוא תא pluripotent. שידור germline כבר את תקן הזהב עבור הוכחת pluripotence של תא גזע עובריים בעכבר (המסקלין) שורות 1,2,3. שימוש assay זה, החוקרים יכולים להראות כי הקו המסקלין יכול לעשות את כל סוגי התאים בעובר כולל בתאי הנבט 4. עם הדור של האדם ESC קווים 5,6, assay המתאים להוכיח pluripotence של תאים אלה לא היה ברור מאז ESCs אדם לא יכול להיבחן לשידור germline. כתחליף, assay תפלצת רוחנית משמשת כיום להפגין pluripotency בתאי גזע האדם גזע pluripotent (hPSCs) 7,8,9. למרות assay זה הגיע לאחרונה תחת בדיקה וטכנולוגיות חדשות נבדקות באופן פעיל, assay תפלצת רוחנית הוא תקן הזהב הנוכחי 7. ב assay זה, התאים המדוברים מוזרקים לעכבר נפגעת מערכת החיסון. אם התאים pluripotent, תפלצת רוחנית בסופו של דבר לפתח קטעי הגידול יראה רקמות מכל 3 שכבות הנבט 10. ב assay תפלצת רוחנית, hPSCs יהיה ניתן להזריק לתוך אזורים שונים של העכבר. האתרים הנפוצים ביותר כוללים הזרקת testis הקפסולה, הקפסולה כליות, כבד, או את הרגל או מתחת לעור או לשריר 11. כאן אנו מתארים את פרוטוקול חזקים עבור הדור של teratomas מ hPSCs באמצעות הקפסולה testis כאתר של הגידול.
השיטה המוצגת כאן מספקת אמינה מאוד, באמצעים פשוטים של יצירת teratomas מ hPSCs הקפסולה testis. ישנם מספר פרמטרים קריטיים בטכניקה זו. בפרט, חשוב להזריק שורות תאים hPSC שידוע כי הם להיות pluripotent כביקורת. פרמטרים חשובים נוספים כוללים את מרווח הזמן בין הזרקה והתבוננות הגידול. על שורות תאים כמו WA09, teratomas צריך לשמור על 6-8 שבועות. על קווים חדשים iPSC אנו מוצאים כי לעתים קרובות 10 שבועות נדרשים. חשש נוסף הוא מספר התאים המוזרקים. אנחנו מזריקים מיליון תאים, אך assay יכול להיעשות בקלות עם פחות תאים. בנוסף, בינוני זריקה חשובה. אנו מוצאים כי אנחנו מקבלים את התוצאות הטובות ביותר כאשר התאים מוזרקים בתערובת 01:01 של matrigel ו DMEM/F-12, לעומת PBS או DMEM/F-12.
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו מומנה על ידי מענקים CIRM # TR-1250, RT1-01108, ו CL1-00502.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Accutase | Invitrogen | A1110501 |
DMEM/F-12 | Invitrogen | 113300-032 |
Matrigel | BD Biosciences | 354277 |