Les cellules souches pluripotentes (hPSCs) ont le potentiel pour traiter une myriade de maladies différentes. L'utilité de ces cellules réside dans le fait qu'elles peuvent se différencier en n'importe quel type cellulaire dans le corps. Nous décrivons ici le dosage tératome, qui est utilisé pour démontrer la pluripotence des hPSCs.
Les cellules souches pluripotentes (CSP) ont la caractéristique unique qu'ils peuvent se différencier en cellules de tous les trois feuillets embryonnaires. Cela les rend un outil potentiellement précieux pour le traitement de nombreuses maladies différentes. Avec l'avènement de cellules souches pluripotentes induites (CISP) et de la recherche continue sur les cellules souches embryonnaires (CSEh) il ya un besoin pour des essais qui peuvent démontrer que d'une lignée cellulaire donnée est pluripotentes. La transmission germinale a été l'étalon-or pour démontrer la pluripotence des cellules souches embryonnaires de souris (CESM) lignes 1,2,3. L'utilisation de ce test, les chercheurs peuvent montrer qu'une ligne MESC peut faire tous les types de cellules dans l'embryon, y compris les cellules germinales 4. Avec la nouvelle génération de CSE humaines lignes 5,6, le dosage approprié pour prouver pluripotence de ces cellules était pas claire, car les CES de l'homme ne peut pas être testé pour la transmission germinale. Comme une mère porteuse, le dosage tératome est actuellement utilisé pour démontrer la pluripotrence des cellules souches pluripotentes humaines (hPSCs) 7,8,9. Bien que ce test a récemment fait l'objet de contrôle et de nouvelles technologies sont actuellement à l'étude, le dosage tératome est l'étalon-or actuel 7. Dans cet essai, les cellules en question sont injectés dans une souris immunodéprimées. Si les cellules sont pluripotentes, un tératome finiront par développer et les articles de la tumeur montrent les tissus de tous les 3 couches germinales 10. Dans le dosage tératome, hPSCs peut être injecté dans différentes zones de la souris. Les sites d'injection les plus courants sont la capsule du testicule, de la capsule du rein, le foie, ou dans la jambe soit sous-cutanée ou intramusculaire 11. On décrit ici un protocole robuste pour la génération des tératomes de hPSCs utilisant la capsule testicule comme site de croissance de la tumeur.
La méthode présentée ici offre une grande fiabilité, des moyens simples de générer des tératomes de hPSCs dans la capsule du testicule. Il ya plusieurs paramètres critiques de cette technique. En particulier, il est important d'injecter des lignées cellulaires HPSC qui sont connus pour être pluripotentes comme un contrôle. D'autres paramètres importants comprennent l'intervalle de temps entre l'injection et l'observation des tumeurs. Pour les lignées cellulaires comme WA09, tératomes devrait être observée dans 6-8 semaines. Pour les lignes iPSC nouvelles, nous constatons que souvent 10 semaines sont nécessaires. Une autre préoccupation est le nombre de cellules injectées. Nous injectons un million de cellules, mais le dosage peut se faire facilement avec moins de cellules. En outre, le milieu d'injection est important. Nous constatons que nous obtenons les meilleurs résultats lorsque les cellules sont injectées dans un mélange 1:1 de matrigel et DMEM/F-12, par opposition à PBS ou DMEM/F-12.
The authors have nothing to disclose.
Ce travail a été financé par des subventions du CIRM # TR-1250, RT1-01108, et CL1-00502.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Accutase | Invitrogen | A1110501 |
DMEM/F-12 | Invitrogen | 113300-032 |
Matrigel | BD Biosciences | 354277 |