L'énucléation des yeux de souris à distance pour le phénotypage à haut débit
Summary
La technique de dissection illustre énucléation de l'oeil de la souris pour la fixation des tissus pour réaliser le phénotypage à haut débit écrans.
Abstract
L'œil de la souris est un modèle important pour l'étude génétique de translation de la maladie ophtalmique humaine. Prévenir la cécité chez l'homme, telles que la dégénérescence maculaire, la dégénérescence des photorécepteurs, la cataracte, le glaucome, le rétinoblastome, et la rétinopathie diabétique ont été récapitulés dans les souris transgéniques. 5.1 La plupart des souris transgéniques et knock-out ont été générées par les laboratoires pour étudier les maladies non ophtalmiques, mais conservation des ressources génétiques entre les systèmes d'organes suggère que bon nombre des mêmes gènes peuvent également jouer un rôle dans le développement oculaire et les maladies. Par conséquent, ces souris constituent une ressource importante pour la découverte de nouvelles corrélations génotype-phénotype dans les yeux. Parce que ces souris sont dispersés à travers le monde, il est difficile d'acquérir, de conserver et de les phénotype d'une manière efficace, rentable. Ainsi, la plupart des écrans à haut débit phénotypage ophtalmiques sont limités à quelques endroits qui ont besoin sur place, l'expertise ophtalmologique pour examiner les yeux chez des souris vivantes. 9.6 Une approche alternative développée par notre laboratoire est une méthode de tissus acquisition à distance qui peut être utilisé dans les enquêtes à petite ou grande échelle des yeux de souris transgéniques. Les procédures standardisées pour la vidéo basée sur le transfert de compétences chirurgicales, la fixation des tissus, et l'expédition permettre à tout laboratoire pour recueillir les yeux entiers à partir d'animaux mutants et les envoyer pour le phénotypage moléculaire et morphologique. Dans cet article, vidéo, nous vous présentons des techniques pour énucléer et transférer à la fois non fixées et la perfusion yeux fixes souris pour les analyses de phénotypage à distance.
Protocol
Discussion
La plupart des souris transgéniques existent dans les laboratoires qui n'examinent pas les yeux. Notre technique vidéo illustre une méthode simple et standardisé pour le transfert de compétences à distance chirurgicale afin d'optimiser l'acquisition des tissus provenant de laboratoires ayant peu d'expérience avec les yeux. Cette technique aide à surmonter vidéo un écueil majeur dans le phénotypage à haut débit, qui est l'utilisation d'un nombre limité de sites spécialisés en raiso…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Research to Prevent Blindness; Bartly J. Mondino MD, directeur de l'Institut Jules Stein Eye, UCLA, et Ramiro Ramirez-Solis, Jacqui blanc, et Jeanne Estabel à l'Institut Sanger, Wellcome Trust Genome Campus. Cette recherche est conforme à la Déclaration ARVO pour l'utilisation des animaux en ophtalmologie et de la recherche visuelle.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Curved Dressing Forcep | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| Mahajan Sharptip dressing forcep | Storz Ophthalmics | E1406 (REF SP7-64520) | |
| Curved Westcott Scissors | Storz Ophthalmics | E3321 WH | |
| 15° BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
| 0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
| 0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
| 30-gauge needle | Becton-Dickinson | 305128 | |
| Biohazard Mailer | Fisher | 03-523-4 | |
| Parafilm | Fisher | 13-374-10 | |
| Glass scintillation vials | Wheaton | 4500413033 | |
| PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
| 16% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 2.5% Paraformaldehyde/ 2.5% Glutaraldehyde in 0.1M sodium phosphate buffer | Electron Microscopy Sciences | 15700 & 16300 | Mixed in laboratory |
| 50% Glutaraldehyde | Electron Microscopy Sciences | 16300 | |
| 0.25% Formvar | Electron Microscopy Sciences | 15810 | |
| Copper Slot Grid | Electron Microscopy Sciences | M2010-CR | |
| 4% Osmium Tetroxide | Electron Microscopy Sciences | 19140 | |
| Anti-SOD3 antibody | Abcam | Ab21974 | |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11070 | |
| Spurr’s embedding resin | Electron Microscopy Sciences | 14300 |
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