रिमोट phenotyping उच्च throughput के लिए माउस आँख का स्पष्टीकरण
Summary
विच्छेदन तकनीक ऊतक निर्धारण करने के लिए उच्च throughput स्क्रीन में phenotyping प्रदर्शन के लिए माउस आंख की व्याख्या दिखाता है.
Abstract
माउस आंख मानव नेत्र रोग के translational अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण आनुवंशिक मॉडल है. धब्बेदार अध: पतन, फोटोरिसेप्टर अध: पतन, मोतियाबिंद, ग्लूकोमा, retinoblastoma, और मधुमेह रेटिनोपैथी के रूप में मनुष्य में चकाचौंध रोगों ट्रांसजेनिक चूहों में किया गया recapitulated 1-5 हाल ट्रांसजेनिक और पीटा चूहों प्रयोगशालाओं द्वारा उत्पन्न किया गया गैर – नेत्र रोगों का अध्ययन, लेकिन अंग प्रणालियों के बीच आनुवंशिक संरक्षण यह पता चलता है कि एक ही जीन के कई भी आंख का विकास और रोग में एक भूमिका निभा सकते हैं. इसलिए, इन चूहों आंखों में नया जीनोटाइप-phenotype correlations की खोज के लिए एक महत्वपूर्ण संसाधन का प्रतिनिधित्व करते हैं. क्योंकि इन चूहों दुनिया भर में फैले हुए हैं, यह मुश्किल है कि अधिग्रहण, को बनाए रखने के लिए, और उन्हें एक कुशल, लागत प्रभावी ढंग में phenotype. इस प्रकार, सबसे उच्च throughput नेत्र phenotyping स्क्रीन कुछ स्थानों है कि साइट पर, नेत्र विशेषज्ञता की आवश्यकता होती है जीवित चूहों में आंखों की जांच करने के लिए प्रतिबंधित कर रहे हैं6-9 हमारी प्रयोगशाला द्वारा विकसित एक वैकल्पिक दृष्टिकोण दूरस्थ ऊतक अधिग्रहण है कि ट्रांसजेनिक माउस आँखों के बड़े या छोटे पैमाने पर सर्वेक्षण में इस्तेमाल किया जा सकता है के लिए एक विधि है. वीडियो आधारित शल्य कौशल स्थानांतरण, ऊतक निर्धारण, और शिपिंग के लिए मानकीकृत प्रक्रिया किसी भी प्रयोगशाला उत्परिवर्ती पशुओं से पूरी आँखों को इकट्ठा करने के लिए और आणविक और morphological phenotyping के लिए उन्हें भेज देते हैं. इस वीडियो लेख में, हम को मालूम करना और दूरस्थ phenotyping विश्लेषण के लिए दोनों unfixed और छिड़काव निर्धारित माउस आँखों हस्तांतरण तकनीक मौजूद है.
Protocol
Discussion
हाल ट्रांसजेनिक चूहों प्रयोगशालाओं में मौजूद है कि आँखों की जांच नहीं. हमारे वीडियो तकनीक दूरस्थ शल्य कौशल आँखों के साथ थोड़ा अनुभव के साथ प्रयोगशालाओं से ऊतक अधिग्रहण का अनुकूलन हस्तांतरण के लिए एक …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
दिया Bartly जे Mondino एमडी, जूल्स Stein नेत्र संस्थान, UCLA के निदेशक, और रेमिरो Ramirez Solis, Jacqui व्हाइट, और Jeanne Estabel सेंगर इंस्टीट्यूट, वेलकम ट्रस्ट जीनोम कैम्पस में अंधापन को रोकने के रिसर्च. इस शोध नेत्र और दृश्य अनुसंधान में जानवरों के इस्तेमाल के लिए ARVO वक्तव्य के साथ अनुपालन.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Curved Dressing Forcep | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| Mahajan Sharptip dressing forcep | Storz Ophthalmics | E1406 (REF SP7-64520) | |
| Curved Westcott Scissors | Storz Ophthalmics | E3321 WH | |
| 15° BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
| 0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
| 0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
| 30-gauge needle | Becton-Dickinson | 305128 | |
| Biohazard Mailer | Fisher | 03-523-4 | |
| Parafilm | Fisher | 13-374-10 | |
| Glass scintillation vials | Wheaton | 4500413033 | |
| PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
| 16% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 2.5% Paraformaldehyde/ 2.5% Glutaraldehyde in 0.1M sodium phosphate buffer | Electron Microscopy Sciences | 15700 & 16300 | Mixed in laboratory |
| 50% Glutaraldehyde | Electron Microscopy Sciences | 16300 | |
| 0.25% Formvar | Electron Microscopy Sciences | 15810 | |
| Copper Slot Grid | Electron Microscopy Sciences | M2010-CR | |
| 4% Osmium Tetroxide | Electron Microscopy Sciences | 19140 | |
| Anti-SOD3 antibody | Abcam | Ab21974 | |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11070 | |
| Spurr’s embedding resin | Electron Microscopy Sciences | 14300 |
References
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
- Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. Cold Spring Harbor Laboratories, Mouse Genetics Meeting. , (2010).
- Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. . In Research Methods For Mutant Mice. , (2002).
- Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. Retinal degeneration mutants in the mouse. Vision Res. 42, 517-525 (2002).
- Anderson, M. G., Smith, R. S., Hawes, N. L., Zabaleta, A., Chang, B., Wiggs, J. L., John, S. W. Mutations in genes encoding melanosomal proteins cause pigmentary glaucoma in DBA/2J mice. Nat. Genet. 30, 81-85 (2002).
- Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes. Mol. Vis. 5, 22-22 (1999).
- Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. Mouse model resources for vision research. J. Ophthalmol. 2011, 391384-391384 (2011).
- Pinto, L. H., Vitaterna, M. H., Siepka, S. M., Shimomura, K., Lumayag, S., Baker, M., Fenner, D., Mullins, R. F., Sheffield, V. C., Stone, E. M., Heffron, E., Takahashi, J. S. Results from screening over 9000 mutation-bearing mice for defects in the electroretinogram and appearance of the fundus. Vision. Res. 44, 3335-3345 (2004).
- Heckenlively, J. R., Winston, J. V., Roderick, T. H. Screening for mouse retinal degenerations. I. Correlation of indirect ophthalmoscopy, electroretinograms, and histology. Doc. Ophthalmol. 71, 229-239 (1989).
- Tsang, S. H., Gouras, P., Yamashita, C. K., Kjeldbye, H., Fisher, J., Farber, D. B., Goff, S. P. Retinal degeneration in mice lacking the gamma subunit of the rod cGMP phosphodiesterase. Science. 272, 1026-1029 (1996).
- Tsang, S. H., Woodruff, M. L., Jun, L., Mahajan, V., Yamashita, C. K., Pedersen, R., Lin, C. S., Goff, S. P., Rosenberg, T., Larsen, M., Farber, D. B., Nusinowitz, S. Transgenic mice carrying the H258N mutation in the gene encoding the beta-subunit of phosphodiesterase-6 (PDE6B) provide a model for human congenital stationary night blindness. Hum. Mutat. 28, 243-254 (2007).
