Ratón enucleación del ojo por remoto de alto rendimiento fenotipificación
Summary
La técnica de disección ilustra la enucleación del ojo del ratón para la fijación del tejido para realizar el fenotipado de alto rendimiento pantallas.
Abstract
El ojo del ratón es un modelo genético importante para el estudio de traslación de la enfermedad oftálmica humano. Enfermedades que causan ceguera en los seres humanos, como la degeneración macular, degeneración de los fotorreceptores, las cataratas, el glaucoma, el retinoblastoma y la retinopatía diabética se han recapitulado en ratones transgénicos. 1-5 mayoría de los ratones transgénicos y knock-out han sido generados por los laboratorios para estudiar las enfermedades no oftalmológicas, pero conservación genética entre los sistemas de órganos sugiere que muchos de los mismos genes también puede desempeñar un papel en el desarrollo y la enfermedad ocular. Por lo tanto, estos ratones representan un recurso importante para el descubrimiento de nuevas correlaciones genotipo-fenotipo en el ojo. Debido a que estos ratones se encuentran dispersos en todo el mundo, es difícil de adquirir, mantener y fenotipo ellos de una manera eficiente y rentable manera. Así, la mayoría de alto rendimiento pantallas fenotipificación oftálmicas se limita a unos pocos lugares que requieren en el lugar, la experiencia oftálmica para examinar los ojos en ratones vivos. 6-9 Un enfoque alternativo desarrollado por nuestro laboratorio es un método para la adquisición remota de tejido que se puede utilizar en grandes encuestas o en pequeña escala de los ojos de ratones transgénicos. Los procedimientos estandarizados de vídeo basado en la transferencia de habilidades quirúrgicas, la fijación del tejido, y el envío permitir que cualquier laboratorio para recolectar los ojos enteros de animales mutantes y enviarlos por fenotipificación molecular y morfológica. En este artículo, video, presentamos las técnicas de la enucleación y transferir los ojos fijos tanto no fijadas y la perfusión de ratón para el análisis fenotípicos remotos.
Protocol
Discussion
Mayoría de los ratones transgénicos que existen en laboratorios que no examinan los ojos. Nuestra técnica de vídeo ilustra un método simple estandarizado para la transferencia remota habilidad quirúrgica para optimizar la adquisición de tejido de laboratorios con poca experiencia con los ojos. Esta técnica ayuda a vídeo superar un escollo importante en alto rendimiento fenotipificación, que es el uso de un número limitado de sitios de expertos por razones de métodos no normalizados de recogida de tejido y la…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Investigación para Prevención de la Ceguera; Bartly J. Mondino MD, Director del Jules Stein Eye Institute de UCLA, y Ramiro Ramírez-Solís, Jacqui Blanca, y Jeanne Estabel en el Instituto Sanger, Wellcome Trust Genoma Campus. Esta investigación cumple con la Declaración de ARVO para el Uso de Animales en Investigación Oftalmológica y Visual.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Curved Dressing Forcep | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| Mahajan Sharptip dressing forcep | Storz Ophthalmics | E1406 (REF SP7-64520) | |
| Curved Westcott Scissors | Storz Ophthalmics | E3321 WH | |
| 15° BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
| 0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
| 0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
| 30-gauge needle | Becton-Dickinson | 305128 | |
| Biohazard Mailer | Fisher | 03-523-4 | |
| Parafilm | Fisher | 13-374-10 | |
| Glass scintillation vials | Wheaton | 4500413033 | |
| PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
| 16% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 2.5% Paraformaldehyde/ 2.5% Glutaraldehyde in 0.1M sodium phosphate buffer | Electron Microscopy Sciences | 15700 & 16300 | Mixed in laboratory |
| 50% Glutaraldehyde | Electron Microscopy Sciences | 16300 | |
| 0.25% Formvar | Electron Microscopy Sciences | 15810 | |
| Copper Slot Grid | Electron Microscopy Sciences | M2010-CR | |
| 4% Osmium Tetroxide | Electron Microscopy Sciences | 19140 | |
| Anti-SOD3 antibody | Abcam | Ab21974 | |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11070 | |
| Spurr’s embedding resin | Electron Microscopy Sciences | 14300 |
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