Enriquecimiento de las células NK a partir de sangre humana con el Kit de RosetteSep de Tecnologías de la StemCell
Summary
Las células asesinas naturales son una pequeña población de linfocitos. Aquí se muestra la forma de aislar estas células de la sangre humana por selección negativa, utilizando un kit de StemCell Technologies. Las células obtenidas son viables y sin tocar por los anticuerpos, y por lo tanto, listo para ser utilizado para una serie de procedimientos.
Abstract
Asesinas naturales (células NK) son linfocitos granulares grandes citotóxicos que pertenecen al sistema inmune innato y desempeñan un papel importante en la lucha contra el cáncer y las infecciones, pero también están implicados en las primeras etapas del embarazo y el rechazo al trasplante. Estas células están presentes en la sangre periférica, de la que se puede aislar. Las células pueden ser aisladas mediante la selección positiva o negativa. Para la selección positiva se utiliza anticuerpos dirigidos a un marcador de superficie presentes sólo en las células de interés, mientras que para la selección negativa que el uso de cócteles de anticuerpos dirigidos a los marcadores de superficie presentes en todas las células, pero las células de interés. Esta última técnica presenta la ventaja de que las células de interés libre de anticuerpos, lo que reduce el riesgo de activación de las células no deseadas o diferenciación. En este video-protocolo que demuestran cómo separar las células NK de la sangre humana por selección negativa, utilizando el kit de RosetteSep de las tecnologías de StemCell. El procedimiento consiste en la obtención de sangre periférica humana (en una revisión institucional aprobado por la Junta de protocolo para proteger a los seres humanos) y la mezcla con un cóctel de anticuerpos que se unen a los marcadores ausente en las células NK, pero presente en todas las demás células mononucleares presentes en periférico la sangre (por ejemplo, los linfocitos T, monocitos …). Los anticuerpos presentes en el cóctel se conjugan con los anticuerpos dirigidos a la glicoforina A eritrocitos en el. Todas las células no deseadas y los glóbulos rojos por lo tanto, quedará atrapado en los complejos. La mezcla de cóctel de sangre y anticuerpos se diluye, superpuestas en un gradiente de Histopaque, y se centrifuga. Las células NK (> 80% de pureza) se pueden recoger en la interfaz entre el Histopaque y el plasma diluido. Cócteles similares están disponibles para el enriquecimiento de las poblaciones de células, como los linfocitos T humanos.
Protocol
Discussion
Las células aisladas con esta técnica pueden ser divididos en diferentes poblaciones con otros equipos de separación de células.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Rosette Sep cocktail for human NK cells | Reagent | StemCell Technologies | 15065 | |
| PBS, steile, 1x | Reagent | Gibco / Invitrogen | 14040-058 | |
| Fetal calf serum (FCS, FBS) | Reagent | Gibco / Invitrogen | 16140-071 | |
| Histopaque-1077 | Reagent | Sigma | 10771 |
