Der Tierversuch wurde von der kantonalen Veterinäramt (Zürich, Schweiz) zugelassen. Wohnungs-und experimentellen Verfahren wurden in Übereinstimmung mit dem schweizerischen Tierschutzgesetz und entsprechen der europäischen Richtlinie über den Schutz von Tieren zu wissenschaftlichen Zwecken (RICHTLINIE 2010/63/EU DES EUROPÄISCHEN PARLAMENT UND DES RATES vom 22 September 2010) verwendet. 1. Präoperative Überlegungen 1,1 Mice: Wohnwünsche, Allgemeinzustand und Zustandsüberwachung Es wird empfohlen, dass Mäuse von Anbietern geliefert oder übertragen von externen Nagetier Kolonien sollten das Gehäuse Anlage mindestens zwei Wochen vor der Operation kommen. Dieser Zeitraum sollte damit die Tiere an die neue Umgebung und Facility-spezifische Gehäuse anzupassen. Mäuse, die soziale lebende Tiere sollten in kompatiblen Gruppen während dieser Anpassungszeit untergebracht werden. Für die Überwachung einer Person auf derLebensmittel-und Wasserverbrauch, ist jede Maus einzeln ab 3 Tagen vor der Operation bis 10 Tage nach der chirurgischen Implantation Sender untergebracht. Der Zeitplan für Gründung telemetrischen-Sender-tragenden Mäusen ist in Abbildung 1 dargestellt. Entscheidend ist, dass die Tiere zur Operation kommen, bei guter Gesundheit und Kondition. Daher vor der Operation, sollten die Tiere einmal pro Tag überwacht werden für 2-3 Tage zur allgemeinen Zustand (Aussehen, Haltung, spontanes Verhalten) als auch für das Körpergewicht, Lebensmittel-und Wasserverbrauch. Diese Daten werden auf einem Krankenblatt (Allgemeinzustand und Health Monitoring Datenblatt, Tabelle 1) zu einzelnen Ausgangswerte der Allgemeinzustand und die allgemeine Gesundheit und das Wohlbefinden aufzubauen dokumentiert. Alle Tiere, die Krankheitssymptome zeigen oder beeinträchtigtes Allgemeinbefinden vor der Operation sollte aus dem Experiment ausgeschlossen werden. 1,2 Haar Clipping an einem Tag vor der Operation Der Tag vor der Implantation, um die anim rasierenALS für Chirurgie, sind Mäuse betäubt kurz in einem kleinen (8x8x8cm) Perspex Kammer mit Sevofluran (8%) oder Isofluran (5%) in reinem Sauerstoff (600 ml / min). Nach Verlust der aufrichtenden Reflex, ist die Maus aus der Kammer genommen und der vorderen Hals-und Bauch-Haar ist mit dem Tier liegt in Rückenlage recumbence abgeschnitten; Anästhesie ist für ca. 5 Minuten mit einer Nasenmaske mit Sevofluran 3-4% oder gewartet Isofluran 1.5-3% in reinem Sauerstoff mit einer Flussrate von 600 mL / min. Nach Abschneiden der Haare, sind die Tiere zu wecken und sind dann zurück in ihre Heimat Käfig gebracht. 2. Implantation 2.1 Betriebssystem-Umgebung, die Erstellung der Telemetriesender Am Tag der Implantation, sind alle Verfahren in Bezug auf Sender Vorbereitung und Operation auf einer Werkbank mit einer Laminar-Flow-Haube mit einem Operationsmikroskop ausgestattet ist. Aseptischen Bedingungen werden durch die Verwendung von Autoklaven instrum versichertEltern und sterilisiert Materialien und durch die Desinfektion der Werkbank 7. Vor der Implantation werden die telemetrischen Sendern (ETA-F10, Data Sciences International, St. Paul, MN, USA) zuerst hergestellt. Nach dem Entfernen aus ihrer sterilen Verpackung, sind die Leitungen des Senders zu einer Länge geeignet für die Größe der Maus implantiert werden verkürzt. In der Mehrzahl der erwachsenen outbred oder Inzucht-Mäusen kann die rote Elektrode auf ca. 42 mm und die weiß / farblos Elektrode zu einer Länge von ca. 55 mm verkürzt werden. Isolierschlauch aus dem distalen (sensorischen) Teil der Leitungen entfernt: ca. 20 mm Schlauch wird aus der roten Elektrode entfernt, ist etwa 10 mm von Schläuchen aus dem weiß / farblos Elektrode entfernt. Der distale Teil jeder Elektrode (das ist jetzt ohne Schlauch) wird in einer Schleife durch die Festsetzung Ende mit dünnen Seidenfäden (PERMA-Handseide, 6-0, Ethicon, Norderstedt, Deutschland) gebildet. Nach der Vorbereitung der Elektroden ist der Sender in wa platziertrm steriler Kochsalzlösung bereit implantiert, wenn das Tier betäubt und operativ vorbereitet werden. 2,2 Anesthesia Bei 5-10 Minuten vor Einleitung der Inhalationsnarkose, eine Mischung aus Midazolam (4 mg / kg) und Fentanyl (0,04 mg / kg) werden subkutan als Prämedikation verabreicht, wodurch Sedierung und präventive Analgesie. Allgemeine Inhalationsnarkose wird erreicht, indem das Tier in der Induktion Kammer und die Einführung des flüchtigen Anästhetikums (Sevofluran 8% oder Isofluran 5% in reinem Sauerstoff 600 ml / min) induziert. Wenn das Tier Verlust der aufrichtenden Reflex an die Werkbank unter der Sterilbank übertragen wird, und in dorsalen recumbence auf einer speziell entwickelten Metall-Platte mit einer Nasenmaske und Schlauch aus der Narkose Vorrichtung eingebaut zeigt. Anästhesie wird durch Spontanatmung (Sevofluran 3-4% oder Isofluran 1.5-3% in reinem Sauerstoff mit einer Flussrate von 600 mL / min) gehalten. Während der Narkose, das Tier das Auges sind mit Salbe (Vitamin A, Bausch & Lomb, Steinhausen, Schweiz) geschützt. Zwar liegen auf der Metallplatte des Tieres wird durch das Wasser-Bad beheizten Oberfläche erwärmt (39 ° C + / -1) der Werkbank. 2,3 Chirurgie Die Haut der vorderen Hals-und Bauchbereich ist mit 70% Ethanol desinfiziert. A 1 – bis 1,5-cm-langen Schnitt in der Haut aus dem unteren Brustkorb entlang der Mittellinie des Bauches gemacht. Die negativen (weiß / farblos) führen wird subkutan aus dem Thorax an den Hals, wo ein kleiner Schnitt (≤ 0,5 cm) in Längsrichtung gemacht wird getunnelt. Die Haut und das darunter liegende Gewebe sind bereit, um Platz für die Fixierung der Drahtschlinge der Elektrode treffen. Die Drahtschlinge wird zwischen den Muskeln auf der rechten Seite der Luftröhre fest, mit zwei dünnen Seidenfäden (PERMA-Handseide, 6-0, Ethicon, Norderstedt, Deutschland). Die Wunde in den Hals wird dann mit resorbierbaren Fäden verschlossen (Vicryl 6-0, Ethicon, Norderstedt, Deutschland) in Schichten. Die Bauchdecke wird dann an der Linea alba eröffnet und den Körper des telemetrischen Sender in die Bauchhöhle der Maus platziert. Die Drahtschlinge der positiven (rot)-Elektrode mit dem Xiphoid mit Seidenfäden in einer Weise, dass es liegt zwischen Leber und Zwerchfell in der linken oberen Bauchbereich (Abbildung 2) vernäht. Dann werden die Muskelschichten der Bauchregion mit resorbierbaren Fäden (Vicryl 6-0, Ethicon, Norderstedt, Deutschland) geschlossen. Vor dem endgültigen Schließen der Bauchdecke, eine Mischung aus Sulfadoxin und Trimethoprim [(30 mg / kg bzw. 6 mg / kg bzw., gelöst in 1 ml Kochsalzlösung (0,9%) und bei etwa Körpertemperatur (38-39 ° C)] wird in die Bauchhöhle zum Zwecke der Infektionsprophylaxe injiziert und Homöostase zu unterstützen. Schließlich ist die Haut der Bauchgegend mit Heftklammern (Precise, 3 M Health Care, St. Paul, MN, USA) wiederhergestellt. 3. Post-operative Betreuung Nach Abschluss der Operation und Anästhesie, 0,1 mg / kg von Buprenorphin (Temgesic, Essex Chemie AG, Luzern, Schweiz) und 5 mg / kg von Meloxicam (Metacam, Boehringer Ingelheim, Basel, Schweiz) wird subkutan zur Schmerzbehandlung verabreicht, und die Tiere sind auf der linken Seite der warmen (39 ° C + / -1) Oberfläche der Werkbank für etwa 2 Stunden zu erholen. Zusammen mit der Schmerzlinderung (zweimal täglich: Buprenorphin, 0,1 mg / kg und Meloxicam 5 mg / kg) ist eine unterstützende Therapie, bestehend aus 300 ul Glucose (5%) und 300 ul Kochsalzlösung (0,9%) erwärmt auf Körpertemperatur, angewendet subkutan zweimal täglich für 4 Tage. Für weitere Erholung zu unterstützen, lohnt es sich, die Bereitstellung der Tiere mit einer zusätzlichen Trinkflasche mit 15% Glucose-Lösung. Während der Erholungsphase von 4-10 Tagen, ist es empfehlenswert, dass die Tiere gehalten werden warm. Daher ist in unserem Fall, werden die Mäuse in einem Wärmeschrank untergebracht (30 ° C + / – 1). Die Überwachung der Allgemeinzustand und Körpergewicht alssowie Lebensmittel-und Wasserverbrauch, wird einmal täglich nach den allgemeinen Zustand und Health Monitoring Datenblatt (Tabelle 1) für 10 Tage nach der Operation durchgeführt. Humane Endpunkte, dh das Opfer eines Tieres, um unnötiges Leiden und Schmerzen zu vermeiden, wenn Fortschreiten der Erholung ist unbefriedigend, sind unter den folgenden Bedingungen durchgeführt: Wenn in einem schlechten Allgemeinzustand, dh das Tier ist wesentlich apathisch (keine Bewegung, nachdem sie berührt / gedrückt) und seine Körperoberfläche fühlt sich trotz Erwärmung kalt, sollte das Tier sofort eingeschläfert werden. Wenn am Tag 4 nach Sender-Implantation, das Tier deutliche Anzeichen von Apathie zeigt, ist extrem aggressiv oder zeigt keine Nahrungsaufnahme, sollte es sofort eingeschläfert werden. Am Tag 8 nach Sender-Implantation, hat das Tier zu einem deutlichen Anstieg des Körpergewichts im Vergleich zu den vorhergehenden post-operative Tage anzuzeigen. Darüber hinaus hat es auf l verbrauchenOsten 80% der präoperativen tägliche Nahrungsaufnahme. Wenn eine dieser Bedingungen nicht erfüllt ist, sollte das Tier sofort eingeschläfert werden. An 10 Tagen nach der Implantation wird das Tier wieder auf das Tier Zimmer unter Standard-Gehäuse Bedingungen übertragen. Mäuse sollten in kompatiblen Gruppen gehalten werden, um soziale Interaktion zu ermöglichen und die negativen Auswirkungen der langfristigen individuellen Wohnungsbau, die erhebliche Auswirkungen auf das Auslesen der nachfolgenden Experimenten 8, 9 können zu verhindern. Mäuse sollten einen Zeitraum von mindestens 4 Wochen Rekonvaleszenz nach Sender Implantation vor dem ersten Experiment wird und Datenerfassung beginnt. 4. Datenerfassung Die Datenerhebung erfolgt durch Berühren des Tieres mit einem Magneten ausgelöst, woraufhin der Sender eingeschaltet ist. Dataquest ART Software (Data Sciences International, St. Paul, MN, USA) koordiniert die Erfassung, Sammlung, Analyse und graphical Präsentation (in Form von Wellenformen) von Signalen von einem oder mehreren Tieren. Der Erwerb Programm sammelt Daten-Signale an den Computer von der Wandler und Empfänger über ein Data Exchange Matrix (Data Sciences International). Dieses Programm kann entweder sammeln Daten für einen bestimmten Zeitraum in regelmäßigen Abständen oder kontinuierlich Probe und speichern Sie die Daten auf der Festplatte des Computers. Da die Reichweite und die Qualität des abgestrahlten Signals hängt stark von der stofflichen Zusammensetzung des Käfigs und die umliegenden Anlagen (z. B. Metall vs Kunststoff), wird vorgeschlagen, dass der Empfänger Platte so nah an das Tier wie möglich platziert, zB unter dem Tiere "Käfig oder über dem experimentellen Bereich, z. B. Labortisch oder auf dem Laufband. Es wird empfohlen, die korrekte Konfiguration der Aufnahme und Datenübertragung System, indem Sie eine kurze Untersuchung des Echtzeit-Messungen in kontinuierliche Probenahme Modus überprüft werden. Nachdem die Daten gesammelt haben und gespeichert wurden, können sie Plot werdenTed, aufgelistet und analysiert für eine Vielzahl verschiedener Parameter mit der Analyse-Programm. Details der Konfiguration der Recording-System (z. B. die Festlegung der Probenahme modus) und Analyse-Software (z. B. für die Herzfrequenz-Variabilität Parameter, PQ-Intervall und QT-Intervall von biopotential / EKG-Kurven gegründet) kann in der Hersteller-Handbüchern. Wertvolle Tipps für die biometrische Planung und statistischen Methoden nützlich für telemetrische Datenerfassung und Interpretation sind an anderer Stelle 3 veröffentlicht. 5. Repräsentative Ergebnisse: Eine allgemeine Systematik des beschriebenen Verfahrens ist in Abbildung 1 dargestellt. Die Position der implantierten Sender, einschließlich der Lage der Elektroden für den Erhalt Biopotentiale aus dem Herzen (one-Kanal-EKG) ist in Abbildung 2 dargestellt. Beispiele von Rohdaten aus kurzfristigen biopotential Kurven (one-Kanal-EKG) und Langzeit-Herzfrequenz, Körpertemperatur und Bewegungsaktivität Aufnahmen von einzelnenMäuse sind in Abbildung 3 und Abbildung 4 dargestellt, jeweils. Abbildung 5 zeigt ein Beispiel veröffentlichten Daten aus Langzeit-Messungen in Gruppen von Mäusen nach einem Experiment. Mehrere andere Parameter können vom Biopotentiale Kurven eingerichtet werden. Beispiele für die Darstellung der Herzfrequenzvariabilität Parameter 5, QT-Intervalls und PQ-Intervall 10, 11 sind an anderer Stelle veröffentlicht. Tabelle 1. Allgemeinzustand und Gesundheitsüberwachung Datenblatt. Klicken Sie hier, um das Blatt herunter. Diese Vorlage ermöglicht die Überwachung einer einzelnen Maus das Allgemeinbefinden und die Gesundheit. Baseline Untersuchung eines Tieres das Aussehen, Haltung und spontanes Verhalten, sowie Bestimmung von Körpergewicht, sowie Nahrungs-und Wasserverbrauch muss vor der Implantation Chirurgie etabliert einmal pro Tag für 3 Tage. Vergleich von Baseline-Bestimmungen mit den Ergebnissentäglich für 10 Tage nach der Operation dienen, um das Fortschreiten der postoperativen Erholung zu beurteilen. Darüber hinaus sind die postoperative Versorgung und Schmerzbehandlung auch in der Form einer Patientenakte dokumentiert. Hinweise auf humane Endpunkte gegeben sind, um Entscheidungen darüber, ob eine Maus sollte geopfert werden, um unnötige Schmerzen und Leiden zu ersparen, wenn das Tier nicht den Kriterien für eine schnelle Wiederherstellung nach der Implantation zu erleichtern. Abbildung 1. Für die Errichtung telemetrischen-Sender-tragenden Mäusen Schedule. Reihenfolge der Verfahren im Zusammenhang mit der Implantation eines Senders zeigt die Zeitpunkte, an denen eine Maus für Experimente und die Datenerfassung eingesetzt werden können. Abbildung 2. Röntgenbild / Skizze Lage des implantierten Telemetry-Sender. Der Körper des Senders ist in der Bauchhöhle platziert. Der Pluspol wird in eine Drahtschlinge ausgebildet und an die Xiphoidbasis mit Nähten. Die negativen führen wird subkutan aus dem Thorax an den Hals getunnelt und Festnetz als Drahtschlaufe zwischen den Muskeln direkt neben der Luftröhre. Das Röntgenbild wird von den Autoren "früheren Veröffentlichung in Laboratory Animals 9 getroffen. Abbildung 3. Biopotential Kurven. Raw Ausdruck der Ein-Kanal-EKG-Kurven aus einer bewussten Maus und des gleichen Tieres unter Inhalationsnarkose mit Sevofluran. Die Herzfrequenz wird automatisch durch das Telemetrie-System berechnet. Die 3-Sekunden-Sequenz unter Narkose aufgenommenen deutet auf eine Herzfrequenz von 440 Schlägen pro Minute. Die Kurve in der bewussten Maus aufgezeichnet zeigt eine Herzfrequenz von 660 bpm, die innerhalb des erwarteten Bereichs liegt für die Herzfrequenz während des ModusRate körperliche Aktivitäten wie Putzen oder Essen. Von biopotential / one-Kanal-EKG-Kurven, Herzfrequenz-Variabilität Parameter interbeat Intervall und PQ-und QT-Intervalle können mit der Nutzung der Software des Herstellers festgelegt werden. Abbildung 4. Raw Daten aus Langzeit-Messungen in gesunden und kranken Mäusen. Herzfrequenz (Schläge pro Minute), Körpertemperatur (° C) und Bewegungsaktivität (counts) gemessen, während Mäuse einzeln in ihre Heimat Käfig ohne Störung durch den Menschen oder experimentelle Verfahren untergebracht. Die Herzfrequenz wird für 30 Sekunden alle 5 Minuten (Sampling-Frequenz 1000 Hz) aufgezeichnet. Körperkerntemperatur wird für 10 Sekunden alle 5 Minuten abgetastet. Bewegungsaktivität wird kontinuierlich aufgezeichnet gespeichert Intervallen von 5 Minuten. Fünf-Minuten-Datenpunkte sind für 6,5 Tage zurück. Die telemetrische Messungen werden von drei Mäusen mit unterschiedlichen aufgezeichnetkörperlichen Voraussetzungen. Die gesunde Maus zeigt eine deutliche zirkadiane Rhythmik mit normalen Anstieg der physiologischen Werte und Bewegungsaktivität Verhalten während der dunklen (Nacht-) Phase. Im Gegensatz dazu nach großen Operationen wird die Herzfrequenz erhöht, insbesondere in der Sommerzeit-Phase und der Bewegungsaktivität ist deprimiert. Die dritte Maus von chronischen Tumorerkrankung-its zirkadianen Rhythmus der Herzfrequenz und Körpertemperatur erlitten erscheint abgeflacht und Bewegungsaktivität vermindert wird. Repräsentative Daten der Herzfrequenz-Messungen (normale Werte und nach großen Operationen) sind von den Autoren "früheren Veröffentlichung in Altex 12 genommen. Abbildung 5. Beispiel der Präsentation der Ergebnisse aus langfristigen Telemetrie Messungen nach einem Experiment. Die Figur ist von den Autoren "früheren Veröffentlichung in Laboratory Animals 1 entnommen. Als ein beispielhaftes Experiment, eine 50-minütige isoflurane oder Sevoflurananästhesie durchgeführt wurde. Die langfristigen Auswirkungen der Anästhetika auf die Herzfrequenz, Körpertemperatur und Bewegungsaktivität nach wurden die Tiere wach war verglichen. Dank 16-Sender-implantierten Mäusen, telemetrische Daten wurden in acht Mäusen pro Betäubungsmittel aufgenommen, während die Tiere waren Single-untergebracht und dürfen frei herumlaufen in ihre Käfige. Für die Analyse der langfristigen Auswirkungen postanesthetic haben wir berücksichtigt, dass die Werte stark variieren während einer 24-h-Zyklus seit Mäuse hauptsächlich nachts aktiv sind. Daher wurden die Mittel der telemetrischen Werte für jedes Tier einzeln für die Nacht (12 h dunkel) und Tag (12 h Licht) Phasen berechnet. Die individuelle normale Werte wurden durch die Berechnung mittels der drei Tage vor der Anästhesie etabliert. Für jeden Tag nach der Narkose wurde der Mittelwert der dunklen und hellen Phase mit den individuellen Normwerten verglichen, was in Delta-Werte. Somit stellen Delta-Werte Abweichung von der normalen Werte (gegründet vorauf die Anästhesie) an der entsprechenden 12 h Tag und Nacht. Die Säulen stellen den Mittelwert aus acht Mäusen; Balken zeigen die Standardabweichung. Sternchen zeigen signifikant, p ≤ 0,05 (One-way Varianzanalyse für den Vergleich der Gruppe bedeutet, an jedem der vier Tage nach der Narkose mit normalen Werten).