網膜切片の形態学的解析
Summary
このビデオでは、内顆粒層の厚さ、網膜神経節細胞（RGC）の数を定量化し、RGCのサイズを測定する測定含まれる網膜の形態学的分析、3つのタイプを示しています。技術は、形態学的解析のためのシンプルでありながら科学的なプラットフォームを提供することができます。
Abstract
網膜切片の形態学的分析は、網膜疾患を調べるに使用されている。例については、神経細胞が大幅にN-メチル-D-アスパラギン酸（NMDA）誘発性興奮1、網膜虚血再灌流障害2、緑内障3ラットモデルの網膜神経節細胞層（RGCL）で失われた。 INLおよび内網状層の減少（IPL）は、カイニン酸介在型グルタミン酸興奮毒性4に受けたラットの目にシチコリン治療と逆転した厚さ。 RGC密度とソーマのサイズの変化は、眼圧上昇3,5,6の目に別の薬物治療で観察した。したがって、網膜morphometriesを分析する客観的方法を持つことは、網膜の病態と治療戦略の有効性を評価する上で大きな意義であるかもしれない。
網膜の構造は、マルチレイヤーとニューロンEXIいくつかの異なる種類です。網膜の聖。そのような細胞数、細胞の大きさと異なった層の厚さとして、網膜の形態学的パラメータは、細胞培養系よりも複雑です。早い段階で、これらのパラメータは他の市販のイメージングソフトウェアを使用して検出することができます。値は相対値で、通常であり、正確な値に変更すると、さらに正確な計算が必要な場合があります。また、セルサイズと形態のトレースは、特に慢性緑内障モデルでは、正確な統計分析のための十分な感度ではありません。このプロトコルで使用されている測定値は、より正確かつ簡単な方法を提供しました。セルの行とサイズの絶対的な長さは、直接他のファイルにコピーすることが簡単に報告することができます。たとえば、我々は、INLの内側と外側の最も核のマージンを追跡して、厚さを測定するために90度の角度を描画するソフトウェアを使用してラインを形成した。ソフトウェアの助けを借りずに、多分斜線と網膜の厚さの変化がしれませんが個々のオブザーバーの間で再現性がありません。さらに、RGCの数と密度も定量することができる。このプロトコルは、成功すると、網膜の機能を定量の変動を減少させる最小限の変更を検出する感度を向上させます。
このビデオでは、網膜切片の形態学的分析の3種類のデモンストレーションを行います。彼らは、RGCの数を定量化し、絶対値でRGCのサイズを測定し、INLの厚さを測定しています。これらの3つの解析は、ステレオ調査官（ – MicroBrightField株式会社MBFバイオサイエンス）を用いて行われています。技術は、形態学的解析のためのシンプルでありながら科学的なプラットフォームを提供することができます。
Protocol
Discussion
1。より正確な厚さの測定値を得る方法は？
あなたは、トレースウィンドウ内のボタンと左クリック "ズーム"をクリックして画像を拡大することができます。 INL境界線がはっきりと見ることができます。ラインの先端がINLの外側の境界でない場合は、我々は、編集モードで行を調整することができます。関係線を選んだ後、右のトレースウィンドウをクリックして …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究室で目の研究の仕事はアメリカの健康アシスタント財団、ツツジ（1972）基本財産基金、およびHKU小規模プロジェクト基金（20097176185）でサポートされています。
Materials
| Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number |
| Stereo Investigator | MBF Bioscience Analysis Software | MicroBright Field | |
| Microscope | Olympus BX51 | Olympus Corporation | BX51 |
References
- Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)–Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
- Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. Apoptosis and caspases after ischemia-reperfusion injury in rat retina. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 40, 967-975 (1999).
- Luo, X. G., Chiu, K., Lau, H. S., Lee, V. W. H., Yung, K. K. L., So, K. F. The Selective Vulnerability of Retinal Ganglion Cells in Rat Chronic Ocular Hypertension Model at Early Phase. Cellular and Molecular Neurobiology. 29 (8), 1143-1151 (2009).
- Han, Y. S., Chung, I. Y., Park, J. M., Yu, J. M. Neuroprotective effect of citicoline on retinal cell damage induced by kainic acid in rats. Korean J. Ophthalmol. 19, 219-226 (2005).
- Hernandez, M., Urcola, J. H. Retinal ganglion cell neuroprotection in a rat model of glaucoma following brimonidine, latanoprost or combined treatments. Exp. Eye Res. 86, 798-806 (2008).
- Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma. Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).
