Le analisi morfometriche delle sezioni della retina
Summary
Questo video mostra tre tipi di analisi morfometrica della retina, che comprendono la misurazione dello spessore interno strato nucleare, quantificare il numero delle cellule gangliari retiniche (RGC) e misurando le dimensioni delle RGC. La tecnica in grado di offrire una piattaforma semplice, ma scientifico per le analisi morfometriche.
Abstract
Analisi morfometriche delle sezioni retiniche sono stati utilizzati in esame malattie retiniche. Per esempio, cellule neuronali sono stati significativamente perduto nello strato di cellule del ganglio retinico (RGCL) in modelli di ratto con N-metil-D-aspartato (NMDA)-indotta eccitotossicità 1, retinica ischemia-riperfusione 2 e 3 glaucoma. Riduzione della INL e strato interno plessiforme (IPL) spessori sono stati invertiti con il trattamento citicolina negli occhi dei ratti sottoposti a cainico acido-mediata eccitotossicità glutammato 4. Alterazione della densità e le dimensioni RGC soma è stata osservata con trattamenti farmacologici diversi gli occhi con pressione intraoculare elevata 3,5,6. Pertanto, con metodi oggettivi di analisi dei morphometries della retina possono essere di grande importanza nella valutazione delle patologie retiniche e l'efficacia di strategie terapeutiche.
La struttura della retina è multi-strati e diversi tipi di neuroni exist nella retina. I parametri morfometrici della retina come il numero di cellule, la dimensione della cella e spessore degli strati differenti sono più complesso rispetto al sistema di coltura cellulare. All'inizio, questi parametri possono essere rilevati utilizzando altri software commerciali imaging. I valori sono normalmente di valore relativo, e cambiando il valore preciso può essere necessario ulteriore calcolo accurato. Inoltre, l'analisi della dimensione e la morfologia cellulare può non essere corretta e sufficientemente sensibile per l'analisi statistica, soprattutto nel modello glaucoma cronico. Le misure utilizzate in questo protocollo fornito un modo più preciso e veloce. E la lunghezza assoluta della linea e le dimensioni della cella può essere segnalato direttamente e facilmente essere copiati ad altri file. Ad esempio, abbiamo tracciato il margine dei nuclei più interna ed esterna nel INL formando una linea quindi utilizzando il software per disegnare un angolo di 90 gradi per misurare lo spessore. Pur senza l'aiuto del software, la linea obliqua e forse l'evoluzione dello spessore della retina puònon essere ripetibile tra gli osservatori individuali. Inoltre, il numero e la densità di RGC può anche essere quantificato. Questo protocollo diminuisce con successo la variabilità in quantificazione caratteristiche della retina, aumenta la sensibilità nel rilevare modifiche minime.
Questo video dimostra tre tipi di analisi morfometriche delle sezioni retiniche. Essi comprendono misurare lo spessore INL, quantificare il numero di RGC e misurando le dimensioni delle RGC in valore assoluto. Queste tre analisi vengono effettuate con Investigator Stereo (MBF Bioscience – MicroBrightField, Inc.). La tecnica in grado di offrire una piattaforma semplice, ma scientifico per le analisi morfometriche.
Protocol
Discussion
1. Come ottenere una misurazione più accurata dello spessore?
È possibile ingrandire l'immagine facendo clic su "Zoom in" e il pulsante sinistro del mouse nella finestra di tracciamento. Il bordo INL può essere visto chiaramente. Se la punta della linea non è al bordo esterno della INL, siamo in grado di regolare la linea sotto la modalità Editing. Dopo aver scelto la linea interessata, tasto destro del mouse la finestra di rintracciare e selezionare "Inserisci Point in …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Il lavoro sulla ricerca di occhio in questo laboratorio è sostenuto da American Health Foundation Assistant, Azalea (1972) fondo di dotazione, e il Fondo Progetto HKU Small (20097176185).
Materials
| Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number |
| Stereo Investigator | MBF Bioscience Analysis Software | MicroBright Field | |
| Microscope | Olympus BX51 | Olympus Corporation | BX51 |
References
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