Morfometriska Analyser av näthinnans avsnitt

Summary

Denna video visar tre typer av morfometriska analyser av näthinnan, vilka innefattar mätning av inre kärnskiktet tjocklek, kvantifiering av antalet retinala ganglieceller (RGC) och mätning av storleken på RGC. Tekniken kan erbjuda ett enkelt men vetenskapligt plattform för morfometriska analyser.

Abstract

Morfometriska analyser av näthinnan sektioner har använts i granskningen retinala sjukdomar. För exempel, var neuronala celler signifikant förloras i näthinneganglieceller skikt (RGCL) i råttmodeller med N-metyl-D-aspartat (NMDA)-inducerad excitotoxicitet ^1, retinal ischemi-reperfusionsskada ² och glaukom ^3. Minskning av INL och inre plexiformskiktet (IPL) tjocklekar var omvända med citikolin behandling i råtta ögon utsätts för kaininsyra-medierad glutamatexcitotoxicitet ^4. Ändring av RGC densitet och storlekar soma observerades med olika läkemedelsbehandlingar i ögonen med förhöjt intraokulärt tryck ^3,5,6. Därför kan ha objektiva metoder för att analysera de retinala morphometries vara av stor betydelse vid utvärdering av retinala sjukdomar och effektiviteten av terapeutiska strategier.

Näthinnans struktur är flera lager och flera olika typer av nervceller EXIst i näthinnan. De morfometriska parametrar näthinnan såsom cellantal, cellstorlek och tjockleken hos olika lager är mer komplex än den cellkultursystem. Tidigt kan dessa parametrar detekteras med annan kommersiell programvara för bildbehandling. Värdena är normalt relativt värde, och ändra det exakta värdet kan behöva ytterligare exakt beräkning. Dessutom kan spåra den cellstorlek och morfologi inte noggrann och känslig nog för statistisk analys, särskilt i kronisk glaukom modellen. De mätningar som används i detta protokoll gav en mer exakt och enkelt sätt. Och den absoluta längden av linjen och storleken av cellen kan rapporteras direkt och lätt att kopieras till andra filer. Exempelvis härledas vi marginalen på den inre och yttre mest kärnor i INL och bildade en linje sedan med användning av mjukvara för att dra en 90 graders vinkel för att mäta tjockleken. Medan utan hjälp av programvaran, linjen kanske sneda och föränderliga av retinal tjocklek kaninte vara repeterbar bland individuella observatörer. Dessutom kan antalet och densiteten av RGC också kvantifieras. Detta protokoll minskar framgångsrikt variationen kvantifiering funktioner i näthinnan, ökar känsligheten att upptäcka minimala förändringar.

Denna video kommer att visa tre typer av morfometriska analyser av retinala sektionerna. De inkluderar mätning av INL tjocklek, att kvantifiera antalet RGC och mäta storleken på RGC i absolut värde. Dessa tre analyser utförs med Stereo Investigator (MBF Bioscience – MicroBrightField, Inc.). Tekniken kan erbjuda ett enkelt men vetenskapligt plattform för morfometriska analyser.

Protocol

1. Verktyg Mikroskop, Nikon Stereo Investigator, MBF Bioscience – MicroBrightField, Inc. 2. Beredning Innan du arbetar på någon morfometrisk analys, är varje näthinna prov snittades vid 4 mikron tjocklek och genomgår H & E färgning. Näthinnan sektionen är uppdelad i 4 regioner – övre perifera regionen, den övre centrala regionen, den undre perifera regionen och den nedre centrala området. N?…

Discussion

1. Hur att få en mer exakt tjockleksmätning?

Du kan förstora bilden genom att klicka på "Zooma in" knappen och vänsterklicka i spåra fönstret. Den INL gränsen kan ses tydligt. Om spetsen av linjen är inte den yttre kanten av INL, kan vi justera linjen under redigeringsläget. Efter att ha plockat den berörda linjen, högerklicka på spårning fönstret och välj "Infoga Point i Selected Contour". En punkt kan läggas till vid den yttre gränsen, medan punkt läggas…

Materials

Name of the reagent	Type	Company	Catalogue number
Stereo Investigator	MBF Bioscience Analysis Software	MicroBright Field
Microscope	Olympus BX51	Olympus Corporation	BX51