न्यूरॉन्स की फोटो उत्तेजना के लिए सस्ती एलईडी arrays का उपयोग
Summary
वयस्क में जन्मे ChR2 व्यक्त न्यूरॉन्स टुकड़ा electrophysiological तैयारी में चालाकी से किया जा सकता है क्रम में घ्राण तंत्रिका सर्किट के समारोह के प्रति उनके योगदान की जांच करने के लिए.
Abstract
मानक टुकड़ा इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी शोधकर्ताओं ने बिजली या औषधीय जोड़तोड़ 1,2 के जवाब में एकल कक्षों के विद्युत प्रतिक्रिया रिकॉर्डिंग से तंत्रिका circuitry के अलग – अलग घटकों की जांच करने के लिए अनुमति दी गई है. ऑप्टिकली आनुवंशिक रूप से लक्षित न्यूरॉन्स (optogenetics) पर नियंत्रण के तरीकों के आविष्कार के साथ, शोधकर्ताओं ने अब मानक टुकड़ा तैयारी में न्यूरॉन्स के विशिष्ट समूहों पर नियंत्रण का एक अभूतपूर्व स्तर है. विशेष रूप से, channelrhodopsin-2 (ChR2) 3,4 प्रकाश के साथ सहज शोधकर्ताओं न्यूरॉन्स सक्रिय करने के लिए अनुमति देता है. ChR2 मानक टुकड़ा इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी साथ एलईडी आधारित photostimulation सावधान अंशांकन के संयोजन से, हम अधिक से अधिक विस्तार के साथ घ्राण बल्ब, घ्राण प्रणाली के पहले केंद्रीय रिले में वयस्क जन्मे interneurons की भूमिका की जांच कर रहे हैं. ChR2 YFP के वायरल अभिव्यक्ति वयस्क जन्मे न्यूरॉन्स में विशेष का प्रयोग, हम चुनिंदा पुराने के परिवेश में युवा वयस्क जन्मे न्यूरॉन्स नियंत्रण कर सकते हैंघ परिपक्व न्यूरॉन्स. हमारे ऑप्टिकल नियंत्रण एक सरल और सस्ती एलईडी प्रणाली का उपयोग करता है, और हम दिखाने के लिए कैसे इस प्रणाली को समझने के लिए कितना प्रकाश एकल न्यूरॉन्स में गतिविधि spiking आह्वान की जरूरत है calibrated किया जा सकता है. इसलिए, नीले प्रकाश की संक्षिप्त चमक दूर ChR2 transduced नवजात कोशिकाओं का फायरिंग पैटर्न पर नियंत्रण कर सकते हैं.
Protocol
Discussion
तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान के लिए 6 optogenetic उपकरणों की लोकप्रियता में हाल के वर्षों में एक विस्फोट देखा है. एक परिणाम के रूप में, यह तेजी से महत्वपूर्ण है इन नए उपकरणों का उपयोग शुरू करने के इच्छुक प्रयो…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम "युग नेट न्यूरॉन के फ्रेम में जीवन बीमा कंपनी" AG2R ला Mondiale "इकोले देस न्यूरोसाइंसेस डी पेरिस (ENP), Agence Nationale डे ला Recherche" ANR-09-NEUR-004 "द्वारा समर्थित किया गया था "यूरोपीय आयोग, और पाश्चर फाउंडेशन द्वारा FP7 कार्यक्रम के. सेबैश्चियन वैगनर Letten फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material | Type | Company | Catalogue No. |
| Ketamine | 100 mg/ml | Imalgène 1000 | |
| Xylazine | 2% | Rompun | |
| NaCl | &nbps; | Sigma | S5886 |
| KCl | Sigma | P5405 | |
| MgSO4 | Sigma | M1880 | |
| NaHCO3 | Sigma | S5761 | |
| NaHPO4 | Sigma | S5011 | |
| Glucose | Sigma | G7021 | |
| CaCl2 | Sigma | C7902 | |
| Agarose | Sigma | A9539 | |
| Pipette Puller | P-97 | Sutter | |
| Glass Capillaries | 1.5 mm O.D./1.17 mm I.D. | Harvard Apparatus | GC150T-10 |
| LED array | Bridgelux | BXRA-C2000 | |
| Collimating lens | 40 mm beam diameter | Thor Labs | LEDC1 |
| Power supply | 2.8 amp | A1W Electronik | HKO2800 |
| Optical power meter | Thor Labs | PM 100 | |
| Heatsink | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
| Fan | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
| Vibratome | Leica | VT1200S |
References
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