マウス網膜からERG Transretinal·レコーディング：ロッドとコーンの光応答
Summary
我々は、無傷のマウス網膜から桿体と錐体の光応答を取得するためのtransretinal電図（ERG）の録音の比較的簡単な方法について説明します。このアプローチは、それらの光反応を分離し、分離されたフラットマウントされている網膜の間に配置フィールド電極を使用してそれらを記録する光受容体からシナプス伝達のブロックを活用しています。
Abstract
ロッドとコーン：脊椎動物の網膜に結像光受容体の2つの別個のクラスがあります。ロッドは、コーンが急速に明るい光条件の変化の下で継続的に動作するのに対し、光の単一光子を検出することができます。光受容体の外側のセグメントのロッドとコーン特有の視覚的な顔料による光の吸収は、最終的に細胞膜と細胞の過分極における環状ヌクレオチド依存性チャネルの閉鎖につながる光情報伝達カスケードをトリガします。現在および潜在的な膜で、この光誘起変化はどちらか古典的な吸引電極記録手法1,2、または薬理学的にブロックされたシナプス応答コンポーネントを3月5日孤立網膜からtransretinal電図記録（ERG）によって、光応答として登録することができます。後者の方法は、マウスの光受容体からの薬物がアクセス可能な長期的な録音を可能にし、安定した光応答frを得るために、特に便利です。OM乏しいと壊れやすいマウスコーン。円錐の場合には、そのような実験は暗順応6,7の間にコーン感光性回復のプロセスを監視するために、両方の本質的にすべての視覚色素を漂白暗順応条件と、以下の強烈な照明で行うことができます。このビデオでは、ロッドと暗順応マウス網膜からM / L-錐体主導transretinal録音を実行する方法を示します。ロッドの録音は、野生型（C57BL / 6）マウスの網膜を用いて実施される。 8シグナル伝達ロッドを欠くマウスを簡単にするために、コーンの録音は、遺伝子組換えロッドトランスデューシンαサブユニットのノックアウト（ – / – Tα）から取得されます。
Protocol
Discussion
ロッドとコーン主導transretinal ERG記録法は、野生型および遺伝子改変動物の両方で、マウスの光受容体の機能を調べるための強力なツールになっている上記の。基本的な光応答特性の簡単な特性に加えて、この単純な手法に近いから無傷の網膜の準備で実行長期的な実験中に大きな応答の安定性を提供します。野生型マウスの暗順応ロッドの最大応答振幅と感光性の両方が録音の開始から少な…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
失明とEY02687（ワシントン大学眼科視覚科学部）を防ぐため失明を防ぐための研究からキャリア開発賞、NIHの助成金EY19312とEY19543（VJK）によって、同様の研究から無制限の助成金によってサポートされています。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
| DL-AP-4 | TOCRIS bioscience | 0101 | ||
| All other reagents | Sigma-Aldrich | |||
| Glass capillaries | World Precision Instruments | TW100-4 | For making electrodes | |
| Filter paper | HARG | Millipore | HABG01300 | |
| Photometer | UDT Instruments | S350 | For light calibration | |
| Radiometric silicon sensor | UDT Instruments | 221 | For light calibration | |
| Anti-vibration table | Technical Manufacturing Corporation | TMC 78-239-02R, TMC63-26012-01 | To minimize mechanical noise | |
| Air compressor Panther P 15TC | Werther International | P 15TC | Connected to anti-vibration table | |
| Stereomicroscope | LEICA | MZ9.5 | For mouse eye dissection | |
| Infrared image converters | B.E.Meyers | ProwlerTM | Bound to stereomicroscope | |
| Differential amplifier DP-311 |
Warner Instruments | DP-311 | ||
| Axon Digidata 1440A Digitizer | Molecular Devices | 1440A | ||
| Dual Channel 8-pole Filter | KROHN-HITE Corporation | 3382 | ||
| Ceramic resistor | TE Connectivity | CGS SBCHE618RJ | For reheating the perfusion solution | |
| Thermocouple | T | Physitemp Instruments | IT-18 | |
| Temperature monitor | Omega | DPi32 | Connected to thermocouple | |
| LED 505 nm | TT Electronics/ Optek Technology | Digi-key P/N 365-1185-ND | To apply test flashes/bleaching light | |
| Cautery pen | Bovie | AA25 | For marking the dorsal part of the mouse eyeball | |
| pCLAMP 10 Electrophysiology Data Acquisition and Analysis Software | Molecular Devices |
References
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