खमीर में वृद्धि Assays पॉलीग्लुटामाइन विषाक्तता आकलन करने के लिए
Summary
इस पांडुलिपि खमीर में पॉलीग्लुटामाइन की विषाक्तता (polyQ) विस्तार प्रोटीन का आकलन करने के लिए तीन पूरक प्रोटोकॉल का वर्णन<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. इन प्रोटोकॉल को आसानी से खमीर में अन्य misfolded प्रोटीन की विषाक्तता पर नजर रखने के लिए संशोधित किया जा सकता है.
Abstract
प्रोटीन misfolding कई मानव रोगों, अल्जाइमर रोग, पार्किंसंस रोग, और हंटिंगटन 1 बीमारी के रूप में विशेष रूप से neurodegenerative रोगों, के साथ जुड़ा हुआ है. है Huntington रोग (HD) प्रोटीन huntingtin भीतर एक पॉलीग्लुटामाइन क्षेत्र के (polyQ) के असामान्य विस्तार के कारण होता है. polyQ-विस्तारित huntingtin प्रोटीन एक न्यायपालिका रचना (यानी यह misfolds) के उपलब्ध हो जाता है और सेलुलर विषाक्तता 2 का कारण बनता है. कम से कम आठ आगे neurodegenerative रोगों Spinocerebellar ataxias और कैनेडी 3 रोग सहित polyQ विस्तार, की वजह से कर रहे हैं.
मॉडल जीव खमीर polyQ विषाक्तता के सेलुलर और आणविक आधार में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि में मदद की है polyQ-विषाक्तता का अंतर और अंतर – आणविक कारकों के प्रभाव है, और सेलुलर मार्ग है कि कोशिकाओं में प्रभावित कर रहे हैं की पहचान polyQ विस्तार व्यक्त सहित, 3-8 प्रोटीन. महत्वपूर्णly, polyQ विषाक्तता के कई पहलुओं है कि खमीर में पाया गया है अन्य प्रायोगिक प्रणाली में और HD रोगियों से नमूनों में कुछ हद तक reproduced रहे थे, इस प्रकार polyQ विषाक्तता अंडरपाईनिंग बुनियादी तंत्र की खोज के लिए खमीर मॉडल के महत्व का प्रदर्शन.
एक प्रत्यक्ष और अपेक्षाकृत सरल खमीर में polyQ विषाक्तता का निर्धारण करने के लिए व्यक्त polyQ विस्तार प्रोटीन खमीर कोशिकाओं की वृद्धि दोष उपाय है. इस पांडुलिपि तीन पूरक प्रयोगात्मक खमीर में polyQ विस्तार प्रोटीन व्यक्त खमीर कोशिकाओं के विकास को मापने के द्वारा polyQ विषाक्तता का निर्धारण दृष्टिकोण का वर्णन करता है. पहले दो प्रयोगात्मक दृष्टिकोण प्लेटों पर खमीर विकास की निगरानी, तीसरे दृष्टिकोण तरल खमीर BioscreenC साधन का उपयोग संस्कृतियों के विकास पर नज़र रखता है.
इसके अलावा, इस पांडुलिपि प्रायोगिक कठिनाइयों का वर्णन है कि जब खमीर polyQ मॉडल से निपटने हो सकता है और रणनीति है कि या बचने में मदद मिलेगी रूपरेखाइन कठिनाइयों को कम से कम. यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल की पहचान करने और आनुवंशिक रास्ते और छोटे अणुओं है कि polyQ विषाक्तता मिलाना विशेषताएँ इस्तेमाल किया जा सकता है. इसके अलावा, वर्णित assays के खमीर मॉडल में अन्य रोग संबद्ध misfolded प्रोटीन की वजह से विषाक्तता की सटीक विश्लेषण के लिए टेम्पलेट के रूप में सेवा कर सकता है.
Protocol
Discussion
इस पांडुलिपि तीन पूरक प्रयोगात्मक मॉडल जीव खमीर खमीर कोशिकाओं को विषाक्त polyQ विस्तार प्रोटीन व्यक्त की कम वृद्धि पर आधारित में polyQ विषाक्तता को मापने के दृष्टिकोण की रूपरेखा. खमीर में काम प्रोटीन misfolding क?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Duennwald प्रयोगशाला में काम एजिंग रिसर्च (दूर), वंशानुगत रोग फाउंडेशन (HDF) और विलियम वुड फाउंडेशन के लिए अमेरिकी संघ से अनुदान द्वारा समर्थित है.
Materials
| Name of instrument | Company | Catalogue number |
| Frogger (6×8 pins) | V&P Scientific, San Diego | VP 407 AH |
| BioscreenC | Growthcurves USA | 5101370 |
| 100-well Honeycomb plates | Growthcurves USA | 9602550 |
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