Hælde og køre en proteingel ved at genbruge Commercial Kassetter
Summary
Vores protokol viser, hvordan man hælde flere proteingeler ad gangen ved genbrug Invitrogen Nupage Novex minigel kassetter og billige materialer, der indkøbes på et hjem forbedring butik. Dette økonomiske og strømlinet Fremgangsmåden indbefatter en måde at opbevare gelerne ved 4 ° C i nogle få uger. Ved genbrug af plastic gelkassetter fra kommercielt tilgængelige geler, laboratorier, der kører hyppige proteingeler kan spare betydelige omkostninger og hjælpe miljøet.
Abstract
Evaluering af proteiner under anvendelse af natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE-analyse) er en almindelig teknik ved biokemiske og molekylærbiologiske forskere 1-4. For laboratorier, som udfører daglige analyser af proteiner, kan omkostningerne ved kommercielt tilgængelige polyacrylamidgeler (~ $ 10/gel) være betydeligt med tiden. For at mindske denne omkostning, nogle forskere forberede deres egne polyacrylamidgeler. Traditionelle metoder til at hælde disse geler typisk anvender specialudstyr og glas gel plader, der kan være dyrt og udelukker hælde mange geler og gemme dem til senere brug. Derudover kan håndtering af glasplader under rengøring eller gel hælde resultere i utilsigtet brud skabe en sikkerhedsrisiko, som kan udelukke deres anvendelse i bachelor laboratorie klasser. Vores protokol viser, hvordan man hælde flere proteingeler samtidig ved genbrug Invitrogen Nupage Novex minigel kassetter, og billig marialer købt på et hjem forbedring butik. Dette økonomiske og strømlinet Fremgangsmåden indbefatter en måde at opbevare gelerne ved 4 ° C i nogle få uger. Ved genbrug af plastic gelkassetter fra kommercielt tilgængelige geler, laboratorier, der kører hyppige proteingeler kan spare betydelige omkostninger og hjælpe miljøet. Desuden er plast gelkassetterne ekstremt modstandsdygtige over for beskadigelse, hvilket gør dem ideelle til undergraduate laboratorie klasseværelser.
Protocol
Discussion
Protein gelelektroforese er en uundværlig fremgangsmåde til fleste molekylærbiologiske laboratorier. Kommercielt tilgængelige minigelerne sikre et højt niveau af bekvemmelighed, men kan være dyrt. Her viser vi, hvordan man genbruge de minigel kassetter fra et populært mærke af kommercielt tilgængelige minigelerne. Denne fremgangsmåde bevarer bekvemmelighed har en færdiglavet kilde geler, men en brøkdel af omkostningerne ved kommercielt tilgængelige minigeler. Et vigtigt trin i denne procedure anvender den k…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne takker Howard Hughes Medical Institute for UF videnskab for Life pris til AH
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
References
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
