हमारे प्रोटोकॉल को दर्शाता है कैसे रीसाइक्लिंग Invitrogen Nupage NOVEX minigel कैसेट, और कम खर्चीली सामग्री एक घर सुधार की दुकान में खरीदा द्वारा एक समय में कई प्रोटीन जैल डाल. यह किफायती और सुव्यवस्थित विधि 4 डिग्री सेल्सियस पर एक कुछ हफ्तों के लिए जैल की दुकान भी शामिल है. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जैल, प्रयोगशालाओं कि अक्सर प्रोटीन जैल चलाने से प्लास्टिक जेल कैसेट फिर से का उपयोग करके महत्वपूर्ण लागत बचाने के लिए और पर्यावरण की मदद कर सकते हैं.
Abstract
प्रोटीन का मूल्यांकन dodecyl सोडियम सल्फेट polyacrylamide जेल विश्लेषण वैद्युतकणसंचलन (एसडीएस पेज) का उपयोग एक आम तकनीक जैव रसायन और आणविक जीव विज्ञान 1-4 शोधकर्ताओं द्वारा प्रयोग किया जाता है. प्रयोगशालाओं है कि प्रोटीन की दैनिक विश्लेषण करने के लिए, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध polyacrylamide जैल (~ 10/gel डॉलर) की लागत पर काफी समय हो सकता है. इस लागत को कम करने के लिए, कुछ शोधकर्ताओं ने अपने स्वयं के polyacrylamide जैल तैयार करते हैं. इन जैल घनघोर के पारंपरिक तरीकों आमतौर पर विशेष उपकरणों और गिलास जेल प्लेटें कि महंगा हो सकता है और कई जैल डालने के लिये और उन्हें भविष्य के उपयोग के लिए भंडारण रोकना कर सकते हैं का उपयोग. इसके अलावा, सफाई या जेल में डालने का कार्य के दौरान गिलास प्लेट की हैंडलिंग आकस्मिक टूटना एक सुरक्षा के लिए खतरा है, जो स्नातक प्रयोगशाला कक्षाओं में उनके उपयोग छीन कर सकते हैं बनाने में परिणाम कर सकते हैं. हमारा प्रोटोकॉल दर्शाता है कि कैसे कई प्रोटीन जैल डाल करने के लिए एक साथ रीसाइक्लिंग Invitrogen Nupage NOVEX minigel कैसेट के द्वारा, और सस्ती माterials एक घर सुधार की दुकान पर खरीदा है. यह किफायती और सुव्यवस्थित विधि 4 डिग्री सेल्सियस पर एक कुछ हफ्तों के लिए जैल की दुकान भी शामिल है. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जैल, प्रयोगशालाओं कि अक्सर प्रोटीन जैल चलाने से प्लास्टिक जेल कैसेट फिर से का उपयोग करके महत्वपूर्ण लागत बचाने के लिए और पर्यावरण की मदद कर सकते हैं. इसके अलावा, प्लास्टिक जेल कैसेट अत्यंत टूटना है, जो उन्हें स्नातक प्रयोगशाला की कक्षाओं के लिए आदर्श बनाता है के लिए प्रतिरोधी रहे हैं.
Protocol
1. कैसेट की तैयारी साफ़ सामने और एक प्रयोग किया Invitrogen Nupage NOVEX minigel कैसेट, या अन्य वाणिज्यिक minigel के कैसेट की प्लेटें वापस. प्लास्टिक epoxy के लगभग 1-3 मिलीग्राम तैयार और निर्माता के निर्देशों के अनुसार मिश्रण…
Discussion
प्रोटीन जेल वैद्युतकणसंचलन सबसे आणविक जीव विज्ञान प्रयोगशालाओं के लिए एक अनिवार्य विधि है. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध minigels सुविधा के एक उच्च स्तर प्रदान करते हैं, लेकिन महंगा हो सकता है. यहां हम बताते है?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों मुख्यालय हॉवर्ड ह्यूजेस मेडिकल इंस्टीट्यूट जीवन पुरस्कार के लिए एक UF विज्ञान के लिए धन्यवाद
Materials
Name of reagent
Company
Catalogue number
Comments
Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm)
Invitrogen
NC2010
Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells
Plastic Epoxy
Loctite
108771
Electrical Tape
Scotch
125 mL side arm flask
Pyrex
5360
4X Tris-Base resolving gel buffer
1.5 M Tris-base pH 8.7
acrylamide
Fisher Scientific
01065-500
Bis-acrylamide
MP Biomedicals, Inc.
800173
30.8% acrylamide solution
30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O
10% APS
Fisher Scientific
BP179-25
0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use
TEMED
Arcos Organics
138450500
1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer
5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer
4X Tris-Base stacking gel buffer
1.5 M Tris-base pH 6.8
Gel comb
Invitrogen
NC3015
15 well, 1.0 mm thickness
Impulse Sealer
TEW Electric Heating Equipment
Heat Sealable Pouch
Kapak/Scotchpak
1 pint size (6.5″ x 8″)
Gel storage buffer
1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide
Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X)
Invitrogen
LC2676
DTT
FisherBiotech
BP172-5
10X Tris-Gylcine Running buffer
Invitrogen
LC2675
1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS
Hwang, A. C., Grey, P. H., Cuddy, K., Oppenheimer, D. G. Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes. J. Vis. Exp. (60), e3465, doi:10.3791/3465 (2012).