商業カセットを再利用することでタンパク質ゲルを注ぐと実行
Summary
我々のプロトコルは、ホームセンターで購入インビトロジェンNupage NOVEXミニゲルカセット、そして安価な材料をリサイクルして、一度に複数のタンパク質ゲルを注ぐ方法を示しています。この経済的かつ合理化された方法は、数週間のために4℃でゲルを保存する方法が含まれています。市販のゲル、頻繁な蛋白質のゲルを実行ラボからプラスチック製のゲルカセットを再利用することで大幅にコストを節約し、環境を助けることができます。
Abstract
ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）分析を用いたタンパク質の評価は、生化学や分子生物学の研究者が1から4で使用される一般的な手法です。タンパク質の毎日の分析を行う研究室では、市販のポリアクリルアミドゲル（〜$ 10/gel）のコストは、時間の経過とともにかなりのことができます。このコストを軽減するために、いくつかの研究者が独自のポリアクリルアミドゲルを準備します。これらのゲルを注ぐの伝統的な方法は、通常、特殊な装置で高価になると多くのゲルを注ぎ、将来の使用のためにそれらを格納し排除することができるガラスゲルプレートを利用しています。また、クリーニングや注入ゲル中のガラスプレートの処理は、学部研究室の授業での使用を排除することが安全上の問題を作成、偶発的破損が発生することがあります。我々のプロトコルは、Invitrogen Nupage NOVEXミニゲルカセットをリサイクルして、同時に複数の蛋白質ゲルを注ぐ方法を示していますし、安価なミリアンペアterialsは、ホームセンターで購入。この経済的かつ合理化された方法は、数週間のために4℃でゲルを保存する方法が含まれています。市販のゲル、頻繁な蛋白質のゲルを実行ラボからプラスチック製のゲルカセットを再利用することで大幅にコストを節約し、環境を助けることができます。さらに、プラスチック製のゲルカセットは、学部研究室の教室のために理想的破損、非常に耐性があります。
Protocol
Discussion
タンパク質のゲル電気泳動は、ほとんどの分子生物学研究所のために不可欠な方法です。市販のミニゲルでは、利便性の高いレベルを提供していますが、コストがかかる場合があります。ここでは、市販のミニゲルの人気ブランドからミニゲルカセットを再利用する方法を示しています。このメソッドは、ゲルの既製のソースを持つことの利便性を保持しますが、市販のミニゲルの数分の一?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、AHに生命賞のUF科学ハワードヒューズ医学研究所に感謝
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
References
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
