Derramando e executando um gel de proteína através da reutilização Cassetes comerciais
Summary
Nosso protocolo demonstra como colocar o gel de proteínas múltiplas em um momento de reciclagem Invitrogen Nupage cassetes Novex minigel e materiais baratos comprados em uma loja da melhoria home. Este método económico e simplificado inclui uma forma de armazenar os géis a 4 ° C durante algumas semanas. Ao re-utilizando as cassetes de gel de plástico de géis disponíveis no mercado, laboratórios que funcionam géis de proteína freqüentes podem economizar custos significativos e ajudar o meio ambiente.
Abstract
A avaliação de proteínas utilizando dodecil sulfato de sódio em gel de poliacrilamida a análise de electroforese (SDS-PAGE) é uma técnica comum utilizado por pesquisadores Bioquímica e Biologia Molecular 1-4. Para laboratórios que realizam análises diárias de proteínas, o custo de géis de poliacrilamida comercialmente disponível (~ $ 10/gel) pode ser considerável ao longo do tempo. Para reduzir este custo, alguns pesquisadores preparar seus próprios géis de poliacrilamida. Os métodos tradicionais de verter estes geles tipicamente utilizar equipamento especializado e placas de vidro de gel que podem ser caros e impede vertendo géis muitos e armazená-los para uso futuro. Além disso, a manipulação de placas de vidro durante a limpeza ou gel vertendo pode resultar em quebra acidental criar um risco de segurança, que pode impedir o seu uso em classes de laboratório de graduação. Nosso protocolo demonstra como colocar o gel de proteínas simultaneamente pela reciclagem Invitrogen Nupage cassetes Novex minigel, e ma baratariais comprado em uma loja da melhoria home. Este método económico e simplificado inclui uma forma de armazenar os géis a 4 ° C durante algumas semanas. Ao re-utilizando as cassetes de gel de plástico de géis disponíveis no mercado, laboratórios que funcionam géis de proteína freqüentes podem economizar custos significativos e ajudar o meio ambiente. Além disso, cassetes de gel de plástico são extremamente resistentes à quebra, o que os torna ideal para salas de aula de laboratório de graduação.
Protocol
Discussion
Eletroforese em gel de proteína é um método indispensável para laboratórios de biologia molecular mais. Minigels comercialmente disponíveis fornecer um elevado nível de conveniência, mas pode ser caro. Aqui nós mostramos como reutilizar as fitas minigel de uma popular marca de minigels disponíveis comercialmente. Este método retém a conveniência de ter uma fonte pronta de géis, mas a uma fracção do custo de minigels comercialmente disponíveis. Um passo chave neste processo está a aplicar a quantidade c…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores agradecem ao Instituto Médico Howard Hughes para uma ciência UF para a concessão de Vida para AH
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
References
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
