Заливка и запуск Белки гель за счет повторного использования коммерческих Кассеты
Summary
Наш протокол свидетельствует о том, как влить несколько гелей белка на время переработки Invitrogen Nupage Novex кассеты minigel и недорогие материалы, приобретенные в магазине товаров для дома. Этот экономичный и упорядочить метод включает в себя способ хранения гели при температуре 4 ° С в течение нескольких недель. По повторное использование пластиковых кассет геля из имеющихся в продаже гели, лабораторий, которые работают часто гели белков может существенно сэкономить затраты и помочь окружающей среде.
Abstract
Оценка белков с использованием додецилсульфата натрия полиакриламидном геле (SDS-PAGE) анализ общих техника, используемая биохимии и молекулярной биологии исследователи 1-4. Для лабораторий, которые выполняют ежедневный анализ белков, стоимость коммерчески доступных полиакриламидном геле (~ $ 10/gel) может быть значительным с течением времени. Для снижения этой стоимости, некоторые исследователи готовят свои гели полиакриламида. Традиционные методы заливки этих гелей обычно используют специализированное оборудование и стеклянные пластины геля, который может быть дорогим и исключает многие заливки гелей и хранить их для дальнейшего использования. Кроме того, обработка стеклянных пластин во время чистки или гель заливка может привести к случайной поломки создании угрозы безопасности, которые могут препятствовать их использованию для студентов лабораторные занятия. Наш протокол свидетельствует о том, как влить несколько гелей белков одновременно по переработке Invitrogen Nupage Novex кассеты minigel и недорогой маterials приобрести в магазине товаров для дома. Этот экономичный и упорядочить метод включает в себя способ хранения гели при температуре 4 ° С в течение нескольких недель. По повторное использование пластиковых кассет геля из имеющихся в продаже гели, лабораторий, которые работают часто гели белков может существенно сэкономить затраты и помочь окружающей среде. Кроме того, пластиковые кассеты гель чрезвычайно устойчивы к разрушению, что делает их идеальными для студентов классах лаборатории.
Protocol
Discussion
Электрофорез белков гель является незаменимым методом для большинства лабораторий молекулярной биологии. Коммерчески доступные minigels обеспечивают высокий уровень удобства, но может быть дорогостоящим. Здесь мы покажем, как повторное использование minigel кассет с популярной маркой ком?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы благодарят Медицинского института Говарда Хьюза для UF науки для жизни награду AH
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
References
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
