माउस फेफड़े वृक्ष के समान कोशिकाओं का अलगाव
Summary
माउस फेफड़ों के वृक्ष के समान कोशिकाओं का एक उच्च शुद्ध तैयारी में वर्णित है. विशिष्ट पारंपरिक वृक्ष के समान सेल सबसेट के अलगाव के लिए जोर दिया जाता है.
Abstract
फेफड़ों के वृक्ष के समान कोशिकाओं (डीसी) हमलावर रोगज़नक़ों 1,2 tolerogenic प्रतिक्रियाओं के नियंत्रण में के रूप में के रूप में अच्छी तरह से श्वसन तंत्र में 3 संवेदन में एक मौलिक भूमिका निभाते हैं . फेफड़ों के वृक्ष के समान कोशिकाओं के तीन मुख्य सबसेट कम से कम चूहों में वर्णित किया गया है: पारंपरिक डीसी (सीडीसी) 4, plasmacytoid डीसी (PDC) 5 और IFN उत्पादन हत्यारा (IKDC) डीसी 6,7 . सीडीसी सबसेट 8 फेफड़ों में सबसे प्रमुख डीसी सबसेट है.
डीसी सबसेट की पहचान के लिए जाना जाता है आम मार्कर CD11c, एक प्रकार मैं transmembrane (β2) integrin कि monocytes, मैक्रोफेज, neutrophils और कुछ बी कोशिकाओं 9 पर भी व्यक्त किया है. कुछ ऊतकों में, माउस डीसी की पहचान के लिए एक मार्कर के रूप में CD11c उपयोग के लिए मान्य के रूप में तिल्ली, जहां सबसे CD11c + कोशिकाओं सीडीसी सबसेट का प्रतिनिधित्व करते हैं जो प्रमुख उतक अनुरूपता जटिल वर्ग द्वितीय (MHC- II) के उच्च स्तर व्यक्त है. हालांकि, फेफड़ों एक अधिक विषम ऊतक कहाँ हो रहा हैपक्ष डीसी सबसेट, वहाँ एक अलग सेल की आबादी का एक उच्च प्रतिशत है कि MHC-II के निम्न स्तर डटकर CD11c के उच्च स्तर व्यक्त है. CD11c हाय MHC-II लो फेफड़ों के सेल की आबादी इसके लक्षण वर्णन पर और ज्यादातर F4/80, प्लीहा बृहतभक्षककोशिका मार्कर के अपनी अभिव्यक्ति पर आधारित है, फेफड़े के 10 और अधिक हाल ही में मैक्रोफेज के रूप में पहचान की गई है एक संभावित डीसी 11 अग्रदूत के रूप में.
माउस PDC करने के लिए इसके विपरीत में, फेफड़े के प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में सीडीसी की विशिष्ट भूमिका के अध्ययन के एक विशिष्ट मार्कर है कि इन कोशिकाओं के अलगाव में मदद कर सकता है की कमी के कारण सीमित किया गया है. इसलिए, इस काम में, हम करने के लिए एक उच्च शुद्ध माउस फेफड़ों सीडीसी अलग प्रक्रिया का वर्णन. फेफड़े डीसी सबसेट के अलगाव को सांस के रूप में के रूप में अच्छी तरह से रोगज़नक़ों पर्यावरणीय कारकों है कि फेफड़ों में मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को गति प्रदान कर सकते हैं के जवाब में इन कोशिकाओं के समारोह में अंतर्दृष्टि लाभ के लिए एक बहुत ही उपयोगी उपकरण का प्रतिनिधित्व करता है.
Protocol
Discussion
फेफड़े माउस डीसी के अलगाव सांस उत्तेजनाओं की एक विस्तृत श्रृंखला के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण तकनीक है. इन कोशिकाओं को प्राप्त करने की प्रक्रिया में महत्वपूर्ण कदम है कि कोशिकाओं के नुकसान के रूप म?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों LSU फ्लो Cytometry कोर सुविधा microphotographs के साथ उनकी सहायता के लिए सेल छँटाई और पीटर Mottram के साथ उसकी मदद के लिए मर्लिन Dietrich के लिए धन्यवाद करना चाहते हैं. यह काम उड़ान परिचर चिकित्सा अनुसंधान संस्थान, LSU अनुसंधान प्रतियोगी कार्यक्रम पुरस्कार, और NIH / NIAID RR020159 P20 और R03AI081171 अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACK lysing buffer | Invitrogen | D6-0005DG | |
| Anti-mouse CD11c (HL3) | BD Pharmingen | 5580979 | PE-Cy7 conjugated |
| Anti-mouse I-A/I-E (269) | BD-Pharmingen | 553623 | FITC conjugated |
| Collangenase Type 1A | Sigma | 9891-500MG | |
| Cell strainers | BD Falcon | 352340, 352360 | |
| CD11c (N418) Microbeads | Miltenyi | 130-052-001 | |
| DNase I | Sigma | D5025-150KU | |
| Hank’s Balanced Salt solution | Invitrogen | 14170 | |
| Hepes buffer solution | Invitrogen | 15630 | |
| Petri dishes 60 mm | BD Falcon | 351016 | |
| GentleMACS™ C tubes | Miltenyi | 130-093-237 | |
| Gentle MACS dissociator | Miltentyi | 130-093-235 | |
| AutoMACS-Pro™ | Miltenyi | 130-092-545 | |
| FASCS Aria | BD |
References
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