प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य माउस sciatic तंत्रिका और पूरे पर्वत स्नायु विश्लेषण द्वारा पुनर्जनन के बाद आकलन क्रश
Summary
इस रिपोर्ट में हम sciatic तंत्रिका के लिए माउस को कुचलने के लिए एक विधि का वर्णन. इस विधि आसानी से उपलब्ध रक्तवाहिका संदंश का उपयोग करता है और आसानी से और reproducibly पूरा sciatic तंत्रिका कुचलने के उत्पादन. इसके अलावा, हम एक विधि का वर्णन करने के लिए पूरे मांसपेशी तंत्रिका पुनर्जनन sciatic तंत्रिका को कुचलने के बाद के विश्लेषण के लिए उपयुक्त है mounts तैयार.
Abstract
परिधीय तंत्रिका तंत्र (पीएन) के उत्थान व्यापक रूप से दोनों मानव रोग के लिए अपनी प्रासंगिकता के लिए और मजबूत पुनर्योजी पीएन जिससे संभवतः CNS के एक उत्थान की विफलताओं को रोशन न्यूरॉन्स द्वारा घुड़सवार प्रतिक्रिया को समझने अध्ययन किया है. Sciatic तंत्रिका क्रश (अक्षतंतुविच्छेद) के 2 कृन्तकों में परिधीय तंत्रिका चोट का सबसे आम मॉडल में से एक है. बीच में आता है कुचल सभी axons लेकिन श्वान सेल बेसल laminae संरक्षित कर रहे हैं ताकि उत्थान 3,4 इष्टतम है. इस अन्वेषक ठीक एक से बढ़ अक्षतंतु की क्षमता दोनों श्वान सेल और बेसल 4 laminae के साथ बातचीत करने के लिए अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है. चूहे आम तौर पर से प्रयोगात्मक तंत्रिका कुचलने के लिए पसंदीदा पशु मॉडल किया गया. वे व्यापक रूप से उपलब्ध हैं और उनके lesioned sciatic तंत्रिका मानव तंत्रिका घावों 5,4 के एक उचित सन्निकटन प्रदान करता है. चूहा तंत्रिका की तुलना में आकार में छोटे हालांकि, माउस तंत्रिका इसी तरह के कई गुण हैं. सबसे महत्वपूर्ण हालांकि समझौता ज्ञापनों,ई मॉडल ट्रांसजेनिक लाइनों की व्यापक उपलब्धता की वजह से तेजी से मूल्यवान हैं अब व्यक्तिगत तंत्रिका उत्थान 6, 7 के लिए महत्वपूर्ण अणुओं के एक विस्तृत विच्छेदन के लिए अनुमति देता है. पिछले जांचकर्ताओं कई तरीकों का इस्तेमाल किया है एक तंत्रिका क्रश या चोट सहित सरल angled संदंश, ठंडा संदंश, रक्तवाहिका संदंश, संवहनी clamps, और अन्वेषक डिजाइन 8,9,10,11,12 clamps के उत्पादन के लिए. जांचकर्ता भी चोट सीवन, कार्बन कणों और फ्लोरोसेंट 13,14,1 मोती सहित साइट अंकन के विभिन्न तरीकों का इस्तेमाल किया है. हम हमारे लिए सही और लगातार क्रश ठीक रक्तवाहिका संदंश और बाद में कार्बन कुचलने साइट अंकन का उपयोग कर साइट के अंकन के साथ reproducibly पूरा sciatic तंत्रिका कुचलने प्राप्त विधि का वर्णन करता है. हमारे sciatic तंत्रिका कुचलने प्रक्रिया के विवरण के भाग के रूप में हम भी शामिल है मांसपेशी पूरी की एक अपेक्षाकृत सरल विधि माउंट हम बाद में उत्थान यों का उपयोग करें.
Protocol
Discussion
हम एक के कुचलने साइट का सटीक अंकन के साथ मज़बूती से पूरा sciatic तंत्रिका कुचलने प्राप्त विधि प्रस्तुत किया है. जैसा कि पहले उल्लेख किया है, sciatic तंत्रिका कुचलने चूहों और चूहों में परिधीय तंत्रिका चोट का एक आ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम में एनआईएच K08NS065157 (TAF के लिए) इसके अलावा अनुदान द्वारा समर्थित किया गया, musculoskeletal विकारों के लिए पेन केंद्र, गठिया के राष्ट्रीय संस्थान से पुरस्कार संख्या P30AR050950, Musculoskeletal और त्वचा रोग (TAF और स्टीवन एस Scherer) के इस काम का समर्थन किया. अंत में, श्राइनर्स बाल चिकित्सा अनुसंधान केंद्र बीज धन (TAF) इस काम का समर्थन किया. हम शुरू में उसकी सहायता के लिए चित्रा 1 के नमूने के उत्पादन में पूरे माउंट प्रक्रिया और एमी ए किम प्रदर्शन के लिए डॉ. युवा जिन बेटा स्वीकार करना होगा.
Materials
| Name (description/quantity) | Supplier | Catalogue Number |
| Mini Clipper with No. 0000 Blade | Roboz | RC-5903 |
| Nair Hair Remover (9 oz.) | Church and Dwight Co., Inc. | N/A |
| Betadine Surgical Scrub (1 gallon) | Fisher Scientific | 19066452 |
| Ophthalmic Ointment (1 oz.) | Fisher Scientific | 19082795 |
Surgical Tools:
| Name (description/quantity) | Supplier | Catalogue Number |
| FST 250 Hot bead sterilizer | Fine Science Tools | 18000-45 |
| Iris Scissors (11 cm long) | World Precision Instruments | 500216 |
| Potts-Smith Forceps (Straight; 18cm; 1×2 Teeth) | Fine Science Tools | 11024-18 |
| McPherson-Vannas Scissors (5 mm blades) | World Precision Instruments | 14124-G |
| Dumont #5 Forceps – Dumoxel Standard Tip | Fine Science Tools | 11252-30 |
| Dumont #5/45 Forceps – Dumoxel Standard Tip | Fine Science Tools | 11251-35 |
| Ultra Fine Hemostats (Straight; Smooth Inside Surfaces) | Fine Science Tools | 13020-12 |
| Powdered Activated Carbon (500 g) | Fisher Scientific | C272-500 |
| Size 6-0 Sutures with C-1 Needle (Sterile, Silk, Black, Braided , Non-absorbable; 18” Length; Box of 36) | Roboz | SUT-1073-11 |
| Reflex Clip Applier (for 9 mm clips) | World Precision Instruments | 500345 |
| 9mm Stainless Steel Reflex Clips (100/box) | World Precision Instruments | 500346 |
Animal Care:
| Name (description/quantity) | Supplier | Catalogue Number |
| 0.9% Sodium Chloride Injection (Preservative Free; 20 mL) | Hospira | 0409-4888-20 |
| Complete Homeothermic Blanket System with Flexible Probe (Medium, 115 VAC, 60 Hz) | Harvard Apparatus | 507222F |
Surgical Platform and Retractors:
(purchased at local hardware store)
| Name (description/) | Quantity |
| Stainless Steel Platform (Milled; ~12”x12”x1/8”) | 1 |
| Button Magnets (Example: Eclipse E825) | 3 |
| Stainless Steel Bolts (3” Long; Diameter Determined by Button Magnets) | 3 |
| Stainless Steel Nuts (Sized to Fit Bolts) | 9 |
| Rubber Bands (Light Tension) | 3 |
| Insect Pins (Both Ends Bent to Form Hooks) | 3 |
Semi-Thins:
| Name (description/quantity) | Supplier | Catalogue Number |
| Paraformaldehyde (1 kg) | Sigma-Aldrich | P6148-1KG |
| Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous (500 g; Used to Prepare Phosphate Buffer) | Fisher Scientific | S375-500 |
| Sodium Phosphate Monobasic Anhydrous (1 kg; Used to Prepare Phosphate Buffer) | Fisher Scientific | AC38987-0010 |
| Glutaraldehyde (50%; 10 x 10 mL) | Ted Pella, Inc. | 18431 |
| Osmium Tetroxide (4% Aqueous, 10 x 10 mL) | Ted Pella, Inc. | 18465 |
| Propylene Oxide (450 mL) | Ted Pella, Inc. | 18601 |
| Embed 812 (Kit, for hard blocks/high image contrast) | Electron Microscopy Sciences | 14120 |
| Toluidine Blue (25 g) | Ted Pella, Inc. | 19451 |
Whole Mount Muscle Preparation and Immunohistochemistry:
| Name (description/quantity) | Supplier | Catalogue Number |
| Paraformaldehyde (1 kg) | Sigma-Aldrich | P6148-1KG |
| Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous (500 g; Used to Prepare Phosphate Buffer) | Fisher Scientific | S375-500 |
| Sodium Phosphate Monobasic Anhydrous (1 kg; Used to Prepare Phosphate Buffer) | Fisher Scientific | AC38987-0010 |
| 10% BSA Diluent/Blocking Solution (200 mL) | Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc. | 50-61-00 |
| Triton X-100 (100 mL) | Dot Scientific Incorporated | 9002-93-1 |
| Glycine, 98% (1 kg) | Fisher Scientific | AC12007-0010 |
| Tissue-Tek Cryo-OCT Compound (Case of 12; 4 oz bottles) | Fisher Scientific | 14-373-65 |
| Sylgard DOW 170 (2 lb. Kit) | Fisher Scientific | NC9492579 |
| Stainless Steel Insect Pins, Size 1 (100/pkg) | Fine Science Tools | 26001-40 |
| Tetramethylrhodamine-A-Bungarotoxin (0.5 mg) | Sigma-Aldrich | T0195-.5MG |
| Mouse Monoclonal Antibody Against SMI-312 (0.1 mL) | Covance | SMI-312R |
| Mouse Monoclonal Antibody Against SV2 (0.1 mL) | Developmental Studies Hybridoma Bank (DSHB) | SV2 |
| Rabbit Polyclonal Antibody Against GAP-43 | Novus Biologicals | NB300-143 |
| Flourescein Conjugated Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ Subclass 1 Specific | Jackson ImmunoResearch | 115-095-205 |
| DyLight 649 Conjugated Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch | 711-495-152 |
| 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, dilactate; 10 mg) | Invitrogen | D3571 |
| Vectashield Mounting Medium (10 mL) | Vector Laboratories | H-1000 |
| Superfrost Plus Microscope Slides (White; Size: 75 x 25 mm; Pack of 144) | Fisher Scientific | 12-550-15 |
| Fisherfinest Premium Cover Glasses (Size: 40 x 22 mm; Pack of 1 oz.) | Fisher Scientific | 12-548-5C |
References
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