Metodología elastografía por resonancia magnética para la Evaluación de los tejidos Diseñado crecimiento Construct

Summary

El procedimiento muestra la metodología de la elastografía por resonancia magnética para supervisar el desenlace de ingeniería de tejido adiposo y las construcciones de ingeniería tisular a través de osteogénicas evaluación no invasiva local de las propiedades mecánicas mediante la elastografía por resonancia magnética microscópica (μMRE).

Abstract

Ensayos mecánicos tradicionales a menudo da como resultado la destrucción de la muestra, y en el caso de los tejidos a largo plazo diseñado construir estudios, el uso de la evaluación destructiva no es aceptable. Una alternativa propuesta es el uso de un proceso de imagen llamado elastografía por resonancia magnética. La elastografía es un método no destructivo para determinar el resultado de ingeniería mediante la medición de los valores locales de propiedad mecánica (es decir, complejo módulo de corte), que son esenciales para la identificación de marcadores de la estructura y funcionalidad de un tejido. Como un medio no invasivo para la evaluación, el seguimiento de las construcciones de ingeniería con técnicas de imagen como la resonancia magnética (RM) se ha visto un creciente interés en la última década ^1. Por ejemplo, los de resonancia magnética (RM) las técnicas de difusión y relaxometría han sido capaces de caracterizar los cambios en las propiedades químicas y físicas durante el desarrollo de ingeniería tisular ^2. El método propuesto enel protocolo siguiente, se utiliza elastografía microscópico resonancia magnética (μMRE) como una técnica no invasiva MR basado para medir las propiedades mecánicas de los tejidos blandos pequeñas ^3. MRE se consigue mediante el acoplamiento de un actuador mecánico sónica con el tejido de interés y el registro de la propagación de la onda de cizallamiento con un escáner de RM ^4. Recientemente, μMRE ha sido aplicada en la ingeniería de tejidos para adquirir información de crecimiento esencial que tradicionalmente se midió utilizando técnicas mecánicas destructivas macroscópicas ^5. En el procedimiento siguiente, elastografía se logra mediante la formación de imágenes de construcciones de ingeniería con una modificación Hahn spin-eco secuencia junto con un actuador mecánico. Como se muestra en la Figura 1, la secuencia modificada de adquisición de imágenes se sincroniza con la transmisión de ondas de corte exteriores; posteriormente, el movimiento es sensibilizado a través del uso de la oscilación de los pares bipolares. Tras la recogida de las imágenes con movimiento positivo y negativo sensibilización, compleja división de los datos se encuentra una imagen de onda de corte. Entonces, la imagen se evaluó utilizando un algoritmo de inversión para generar un mapa rigidez cortante ^6. Las mediciones resultantes en cada voxel se ha demostrado una correlación significativa (R ^2> 0,9914) con los datos recolectados a través de un análisis mecánico dinámico ^7. En este estudio, la elastografía se integra en el proceso de desarrollo de los tejidos para el control de células madre mesenquimales humanas (h MSC) la diferenciación en las construcciones y adipogenic osteogénico, como se muestra en la Figura 2.

Protocol

1. Preparación de tejidos Construct El tejido de la construcción de proceso de preparación consta de tres etapas principales: la expansión de la población de células, la siembra de células en un andamio biomaterial, y la diferenciación a través del uso de químicos moléculas de señalización. El procedimiento para la preparación de constructo se basa en métodos realizados por Dennis et al., Hong et al., Y Marion y Mao 8,9,10. Después de l…

Discussion

En este procedimiento, el proceso de ERM para construcciones de ingeniería tisular se demuestra de preparación de células para la generación de una elastograma. Mediante la aplicación de un método no destructivo evaluación mecánica a la tubería ingeniería de tejidos, ahora es posible evaluar los cambios en las construcciones de ingeniería a lo largo de múltiples etapas de desarrollo. Además, ERM complementa otros métodos de resonancia magnética para el tejido de vigilancia construcciones de ingeniería ta…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue number	Comments
MSCGM-Bullet Kit	Reagent	Lonza	PT-3001	Store at 4°C
1X DPBS	Reagent	Invitrogen	21600-010
0.05% Trypsin-EDTA	Reagent	Gibco, Invitrogen	25300-054	Store at -20°C
Dexamethasone	Reagent	Sigma-Aldrich	D2915
3-Isobutyl-1-methylxanthine	Reagent	Sigma-Aldrich	I5879	Store at -20°C
Insulin-bovine pancreas	Reagent	Sigma-Aldrich	I6634	Store at -20°C
Indomethacin	Reagent	Sigma-Aldrich	I7378
Β-Glycerophosphate	Reagent	Sigma-Aldrich	G9891
L-Ascorbic Acid 2-phosphate	Reagent	Sigma-Aldrich	A8960
Gelfoam	Scaffold	Pharmacia & Upjohn Co.	09-0315-08
Human mesenchymal stem cells	Cell Line	Lonza	PT-2501
9.4T MR Scanner	Equipment	Agilent		400MHz WB
10mm Litz Coil	Equipment	Doty Scientific
Laser Doppler Vibrometer	Equipment	Polytec	PDV-100
Vibrosoft (20)	Software	Polytec
Function generator	Equipment	Agilent	AFG 3022B
Amplifier	Equipment	Piezo inc	EPA-104-115
Piezo Bending motor	Equipment	Piezo inc.	T234-A4Cl-203X
Computer-Linux	Equipment	Processor: Intel Core 2 Duo E8400 Memory: 2G
Computer-Windows	Equipment	Processor: Intel Core 2 Duo E8400 Memory: 2G
MATLAB	Software	Mathworks, inc		2009b