简化技术<em>原位</em>切除角膜和视网膜组织剜人眼地球

Summary

本文介绍了一个消费角膜简化技术和剔骨从全球人类尸体捐赠者的眼部视网膜组织。这里描述的技术将有助于消费的质量好，可用于移植，手术或研究目的，不损害其他组织的眼部全球的组织。

Abstract

眼球摘除是从捐助者的尸体离开地球的休息不受干扰检索眼全球的过程。切除是指眼组织，尤其是角膜的检索，通过削减从眼部全球分开。剜是去除称为视网膜这里的内部器官的过程。眼全球包括角膜，巩膜，玻璃体，晶状体，虹膜，视网膜，脉络膜，肌肉等（增刊图1）。当病人患有角膜损伤，角膜需要删除与一个健康的，必须由keratoplastic手术移植。视网膜功能的遗传性疾病或缺陷，可能危及视力。可用于各种外科手术，如眼银行，人的角膜或巩膜移植和眼组织的研究人眼地球。然而，有对人体的角膜和视网膜切除提供的资料很少，可能是由于到Limited无障碍人体组织。大多数的研究，描述类似的程序进行的动物模型。研究的科学家们依靠正常解剖和保守的眼组织的可用性，以延长人类眼睛的发育，稳态和功能上的知识。我们收到眼地球的高金额，其中约40％（ 见表1），其中用于研究目的，我们是能够执行这些组织的大量实验，确定技术，消费和定期维护。

角膜是股骨头缺血性的组织，使在视网膜上的光传输，为此，要始终保持良好的透明度程度。在角膜缘地区，这是一个水库的干细胞，有利于上皮细胞的重建和限制结膜增生，维持角膜的​​透明度和清晰度。大小和日角膜ickness是明确的目标的关键，无论是在他们的变化可能导致心烦意乱，视力不清。角膜由5层;一）上皮细胞，B）基质层，鲍曼的C），D）后弹力膜和e）血管内皮细胞。所有层应正常运作，以确保清晰的视野^。4,5,6。脉络膜巩膜和视网膜之间的中间中山装，布鲁赫膜界内部，并负责在眼内的血流量。脉络膜也有助于调节温度和供应营养视网膜外层^5,6。视网膜的神经组织，包括眼全球（增刊图1）的背面，由两部分组成层：photoreceptive的一部分，和非接受的一部分。视网膜接收的光线从角膜和晶状体，它转换成化学能最终传送到大脑视神经^5,6帮助。

ove_content“>本文的目的是提供解剖从人类眼部地球的角膜和视网膜组织的协议。避免交叉污染与癌旁组织和保持RNA的完整性等组织旨在为研究目的是不可或缺的基本重要性于（i）特征的眼组织的转录，（二）隔离干细胞再生医学工程，（三）评价组织从正常/受影响的学科之间的组织学差异，在本文中，我们描述的技术，我们目前使用的删除角膜，眼全球脉络膜和视网膜组织。在这里，我们为人类眼全球，角膜和视网膜组织的切除剥离了详细的协议。影随行，将有助于研究人员了解一个适当的检索技术珍贵的人体组织，这是很难找到定期。

Protocol

1。 在原位角膜切除眼金球奖约15分钟后方可使用的空气层流柜的切换。清洁层流罩，使用70％异丙醇。戴上手术帽和口罩等个人防护服。擦洗手和前臂，用无菌毛巾擦干。戴无菌手套和礼服或袖子使用无菌技术。 设立无菌区，放置无菌无菌仪器托盘。验证该仪器是无菌的。打开无菌工具包和翻转到无菌避免任何污染领域。 随着瓶（眼罐），其中包含眼睛地球仪，使它…

Discussion

内皮损伤或高弹力的褶皱数，如轻微的缺陷可能导致，而温度改变角膜移植失败或处理不当会损害视网膜组织的完整性至关重要，正确的切除和妥善保存角膜和视网膜组织。本文的目的是显示角膜和视网膜组织如何可以分离出最佳诱导移植或研究的目的，可能会危及其使用的损害或改建。所需的最小细胞密度（> 2200个细胞/ mm ^2），良好的形态，如细 ​​胞大小，结构间的边界，并具有?…

Materials

Materials for excision of cornea and retina.

Product description	Dimensions	Company / Institute
Guarded disposable scalpel	Blade size 15	Swann-Morton
Sterile bandages	5 cm X 5 cm, 8 layered, 5 pcs	Artsana
Sterile disposable medical towel	35 X 50 cm	U.Jet
Sterile scissors	Blades 24 mm / overall length. 95 mm curved, blunt	e.janach
Sterile forceps	Stainless steel -100 mm 11 X 2 ruled by 0.70 mm teeth	e.janach
Corneal claw – Disposable medical device		NIIOS (Hippocratech)
	Preparations
PBS	100 ml PBS [10x] in 900 ml d/w (distilled water)	Sigma-Aldrich
Na-thiosulphate	1 gm Na-thiosulphate in 1 litre of PBS [1x]	Sigma-Aldrich
I-PVP	5 gm I-PVP in 1 litre d/w	Sigma-Aldrich

Table 2. The table describes the materials used for excision of cornea and retina and the company they are received from.

Materials for storage medium (2000 ml).

Components	Supplier	Catalogue number	Concentration	Quantity
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034		1900 ml
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10ml/l)	20 ml
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10ml/l)	20 ml
Antibiotic/antimycotic	Sigma-aldrich	A5955-20ML	10ml/l	20 ml
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)	40 ml

Table 3. Materials for storage medium.

Preparation of storage medium

Add all the ingredients using the specific concentrations as given above in a jar and mix well. Filter them using pore size of 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) with help of a peristaltic pump. Preserve the medium in the bottles at RT.

Materials for transport medium (2000 ml).

Components	Supplier	Catalogue number	Concentration	Quantity
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034		1800 ml
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10 ml/l)	20ml
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10 ml/l)	20ml
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)	40 ml
Dextran t500	Pharmacosmos	551005004007	6% (60 gm/litre)	120 g/l

Table 4. Material for transport medium.

Preparation of transport medium

Add Dextran 6% in ~ 1.5 litre of MEM and leave it overnight. Add the rest of ingredients in the media and filter using 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) using a vacuum pump. Preserve the medium in the bottles at RT.