입양 이전 및 Antigenic 챌린지에 의해 실험적 면역 Encephalomyelitis (EAE) 모성 마우스 변종에 응답하지 않는 문제를 극복
Summary
특정 마우스 변종은 myelin 기본 단백질과 함께 실험적인 면역 encephalomyelitis (EAE)의 유도에 저항 할 수 있습니다. 여기에서 설명한 것은 응답하지 않는 문제를 역으로 여러 전형 EAE 모성 마우스 얼룩에 중풍 질환을 유도하는 간단한 예방 접종 프로토콜입니다.
Abstract
실험적 면역 encephalomyelitis (EAE)은 중추 신경계 (CNS)의 염증성 질환이며, 인간의 demyelinating 질환, 다중 경화증 (MS)의 연구를위한 동물 모델로 사용되었습니다. EAE는 CNS에 mononuclear 세포의 pathologic 침투 의해 중풍 질병의 임상 발현이 특징입니다. 다른 강한 반면 MS와 마찬가지로, EAE 그 특정 마우스 종자에 유전자 통제 또한 질병 유도에 감염될 수 있습니다. 일반적으로, C57BL / 6 (H-2 b)는 쥐가 myelin 기본 단백질과 예방 접종 (MBP) 중풍 징후를 개발하기 위해 실패합니다. 여기에 설명된 실험 프로토콜이 C57BL / 6 마우스뿐만 아니라 다른 유명한 모성 마우스 종자에 심각한 EAE를 유도하는 데 사용되었던대로이 응답하지 않는 문제는 확실히 항원 처리 또는 MBP의 항원 프레 젠 테이션의 결함으로 인해하지 않습니다. 또한, C57BL / 6와 MBP에 대한 반응 Balb / C 마우스에서 encephalitogenic T 세포 클론은 성공이었다완전히 격리 및 전파.
실험 프로토콜 (200 μg / 마우스) MBP-중이오 C57BL / 6 기증자 림프절 세포가 격리되고 MBP-특정 T 세포의 수영장을 확장하기 위해 항원과 함께 5 일 동안 배양해있는 셀룰러 입양 전송 시스템을 사용하는 것입니다. 문화 시대 말기에 50,000,000 가능한 전지는 꼬리 정맥을 통해 순진 syngeneic 수신자로 전송됩니다. 그래서 일반적으로 치료받는 생쥐 따라서 그들의 저항 상태를 재확인, EAE를 개발하지 않으며, 그들은 무한정 정상 남아있을 수 있습니다. 열흘 포스트 셀 전송은받는 생쥐 전체 Freund 도움이되는 (CFA) – 유화 측면 네 개의 사이트에 MBP 맡고있다. 심한 EAE는 10-14일 도전 후이 생쥐로 개발하기 시작합니다. 결과는 관련이없는 항원과 도전이 질병의 임상 증상을 유발하지 않았다으로 질병의 유도는 antigenic의 구체적인 것을 보여주었다. 중요한 것은 항원 선량의 적정가로 사용되는도전받는 생쥐는 5 μg / 마우스처럼 낮은 될 수 있다고했다. 또한, antigenic의 도전의 타이밍의 운동 연구 질병을 유발하는 도전 5 일 게시물 antigenic 도전 및 445 일 포스트 antigenic 도전여 그 와중에 이르면 효과였다 보여주었다. 응답하지 않는 문제를 유지 "긴"T 세포 인구의 참여 향한 이러한 데이터는 강력하게 가리 킵니다. 이 시스템의 규제 T 세포 (Tregs)의 참여가 정의되지 않았습니다.
Protocol
Discussion
생쥐에서 EAE의 연구는 종종 neuroantigens, myelin 기본 단백질 (MBP), proteolipid 단백질 (PLP) 또는 myelin oligodendrocyte 단백질 (소)를 사용합니다. 이전 연구는 주로 MBP를 사용했습니다. PLP는 SJL 생쥐에서 강력하고 일관된 반응을 자극. B6 생쥐가이 항원과 질병 유도에 감염될 때문에 최근에는 집고 양이가 사용되는 일반적인 neuroantigen입니다. 유전자 타겟 마우스 종자의 대부분은 B6 유전 배경에 있습니다. 흥미…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
국립 보건원에서 보조금 (R01 NS37253와 N01 NS055167)과 국립 다중 경화증 협회 (RG 3288-A6)에 의해 부분적으로 지원.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Guinea pig spinal cords | Rockland Immuno-chemicals, Inc. Gilbertsville, PA 19525 www.rockland-inc.com |
GP-T065 | frozen |
| Freund’s Adjuvant, complete H37Ra | Difco Laboratories Detroit, MI |
231131 | |
| Multifit interchange-able syringe | B-D www.bd.com/us |
512133 | |
| RPMI 1640 | Mediatech Inc. Manassas, VA www.cellgro.com |
10-040-CM | |
| OVA | Sigma-Aldrich www.sigmaaldrich.com |
A5503 | |
| Mice | Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine |
B6 mice: 0000664 |
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