Langsiktig Dødelig toksisitet Test med krepsdyret Artemia franciscana</em

Summary

Denne studien handler om utvikling og standardisering av en verdifull metodisk protokoll for å bestemme langsiktige (14 dager) dødelig toksisitet utøves av kjemiske stoffer, industrielt avløpsvann eller kloakk og flytende miljøprøver på saltvann krepsdyr,<em> Artemia franciscana</em>.

Abstract

Våre forskningsaktiviteter målrette bruk av biologiske metoder for evaluering av miljøkvalitet, med særlig henvisning til saltvann / brakkvann og sediment. Valget av biologiske indikatorer må baseres på pålitelig vitenskapelig kunnskap, og muligens, på tilgjengeligheten av standardiserte prosedyrer. I denne artikkelen presenterer vi en standardisert protokoll som brukes det marine krepsdyret Artemia å vurdere toksisitet av kjemikalier og / eller marine miljø matriser. Forskere foreslår at saltlake reker (Artemia) er en egnet kandidat for utvikling av en standard bioassay for globalt utnyttelse. En rekke artikler har blitt publisert på de toksiske effektene av ulike kjemikalier og miljøgifter på saltlake reker (Artemia). Den store fordelen med dette krepsdyret for toksisitetsstudier er den generelle tilgjengeligheten av de tørre cyster, disse kan umiddelbart brukes i testing og vanskelig kultivering er ikke etterspurt <sup> 1,2. Er cyste-baserte toksisitet analyser billig, kontinuerlig tilgjengelig, enkel og pålitelig, og er således en viktig svar på rutinemessige behov toksisitet screening, for industriell overvåkning krav eller for regulatoriske formål ^3. Den foreslåtte metoden innebærer dødelighet som et endepunkt. Tallene for overlevende ble talt opp og andelen dødsfall ble beregnet. Larvene ble ansett døde hvis de ikke viser noen intern eller ekstern bevegelse i flere sekunder av observasjon ^4. Denne prosedyren var standardiserte tester en referanse stoff (Sodium Dodecyl Sulfate), og noen resultater er rapportert i dette arbeidet. Denne artikkelen følger en video som beskriver utførelsen av prosessuelle toksisitetstesting, viser alle trinnene knyttet til protokollen.

Protocol

1. Metode Standard Vår testing innebærer å utsette Artemia larver til et intervall på stoff konsentrasjoner eller en stikkprøve for å bestemme konsentrasjonen eller fortynning nivåer som ville føre til døden av 50% av organismene (LC 50) eksponert over 14 dager og møte vilkårene definert av denne metoden. Hvis det er nødvendig og mulig, kan følgende også bestemmes: a) konsentrasjonen nivå som forårsaker død på 20% av organismer som eksponeres (LC 20),…

Discussion

Artemia er en av de mest verdifulle testorganismene tilgjengelige for økotoksisitet testing og forskning gjort så langt kan vi slå fast at det er mulig å opprettholde flere alternativer knyttet til Artemia bruk i toksikologi og økotoksikologi. Kjennetegnene som slår denne organismen i en egnet art for bioassay er: en bred geografisk fordeling, høy tilpasningsevne til ugunstige miljøforhold og varierte næringsstoffer, relativt enkelt laboratorium kultur og vedlikehold, motstand mot manipulasjon…

Materials

Produced by Loredana Manfra of Institute for environmental protection and research (ISPRA-Department of Environmental Quality Monitoring) and Federica Savorelli of Regional Agency for Environmental Protection (Emilia-Romagna, Italy).

Reference Members for the sub-working Group on the Artemia crustacean within the Biological Methods Group – Saltwater/Brackish Water and Sediment of the UNICHIM Commission on Water Quality (the institute for technical standardization operating in the chemical sector).

Videography and editing by Marco Pisapia of ISPRA (Scientific Advisory and Documentation Services).

Production Coordination by Anna Maria Cicero and Erika Magaletti of ISPRA (Department of Environmental Quality Monitoring).

We would like to thank the Regional Agency for Environmental Protection of Emilia-Romagna, Ferrara Branch and the Biological Methods Group – Saltwater /Brackish Water and Sediment of the UNICHIM Commission on Water Quality for their cooperation; Rossella Boscolo and Massimo Gabellini of ISPRA (Department of Prevention and Mitigation of Impacts) for their financial support; and the London School of Languages in Rome for their linguistic support.

Name of the reagent	Company	Product number
Sodium Dodecyl Sulfate	Sigma-Aldrich	L4390

Appendix

The algal media has to be prepared using analytical quality reagents.

A liter of nutrient solution is prepared by dissolving 300 g of NaNO₃, 30 g of KH₂PO₄ and 20 g of NH₄Cl in distilled water.

Four initial solutions (A, B, C, D) of minerals are prepared as follows:

• A liter of solution “A” containing 30 g of ZnSO₄ H₂O, 25 g of CuSO₄ 5 H₂O, 30 g of CoSO₄ 7 H₂O and 20 g of MnSO₄ H₂O in distilled water;
• A liter of solution “B” containing 50 g of FeCl₃ •6 H₂O in distilled water;
• A liter of solution “C” containing 25 g of Na₂MoO₄ •2 H₂O in distilled water;
• A liter of solution “D” containing 50 g di Na₂EDTA •2 H₂O in distilled water.

A liter of a final solution of minerals (solution “E”) is obtained adding aliquots of the above-mentioned solutions to distilled water. The following order of addition is recommended: 100 ml of solution “D”, 10 ml of solution “C”, 10 ml of solution “B” and 10 ml of solution “A”.

Three initial solutions (F, G, H) of vitamins are prepared as follows:

• A liter of solution “F” containing 100 mg of biotin in distilled water;
• A liter of solution “G” containing 10 g of thiamine in distilled water;
• A liter of solution “H” containing 100 mg of cobalamin in distilled water.

A liter of a final solution of vitamins (solution “I”) is obtained adding 10 ml of the three initial solutions to distilled water.

A liter of the algal media is prepared by dissolving 1 ml of the nutrient solution, 1 ml of the mineral final solution (solution “E”) and 1 ml of the vitamin final solution (solution “I”) in seawater. This latter may be obtained by dissolving recognized analytical quality reagents or a commercially available formulation in distilled or de-ionized water. Salt blends for creating the ideal saltwater are commercially available, e.g. the Instant Ocean mixtures. It is recommended the using of a seawater with salinity of 30 (±2) PSU and temperature of 20 (±1) °C.