마이크로 유체 플랫폼을 사용하여 높은 처리량 단백질 표현 생성기
Summary
우리는 단백질 배열의 표현을위한 마이크로 유체 접근 방식을 제시한다. 이 장치는 마이크로 기계 밸브에 의해 제어 반응 챔버의 수천으로 구성되어 있습니다. 마이크로 유체 장치는 microarray 인쇄 유전자 도서관에 결합되어 있습니다. 이러한 유전자 그런 다음 베꼈 및 실험 사용할 준비가 단백질 배열의 결과로, 칩에 번역되어 있습니다.
Abstract
이러한 시스템 생물학 등 급속도로 증가 분야는 대규모 시스템의 높은 처리량 및 고 충실도 측정을 가능하게하는 새로운 기술의 개발과 구현을 필요로합니다. Microfluidics는 생화학 biophysical 및 셀 기반 assays에게 1 포괄 같은 칩에 높은 처리량 검사 실험을 수행으로 이러한 요구 사항의 많은 부분을 수행하기 위해 약속드립니다. microfluidics 장치의 초기부터,이 필드는 크게 마이크로 대규모 통합 2,3의 개발로 이어지는, 발전하고 있습니다. 이 기술은 우표 크기의 풋 프린트 (그림 1) 단일 장치에 micromechanical 밸브의 수천의 통합 할 수 있습니다. 우리는 PING (단백질 상호 작용 네트워크 생성기)이라는 단백질 어레이 (그림 2)의 체외 식에 생성하기위한 높은 처리량 마이크로 유체 플랫폼을 개발했습니다. 이러한 배열은 많은 실험을위한 템플릿으로 제공 할 수같은 단백질 단백질 4, 단백질 RNA 5 단백질 DNA 상호 작용 6.
이 장치는 개별적으로 microarrayer를 사용하여 프로그램되어 반응 챔버의 수천으로 구성되어 있습니다. 표준 microarray 야생 기술을 사용하여 microarrays를 생성, 또한 잠재적 인 오염 또는 교차 반응성을 제거 하나의 장소로 microfluidics 장치 프로그램에 이러한 인쇄 microarrays의 각 방을 정렬하면, 단백질 7, DNA 8, 작은 분자의 arraying을 허용하는, 매우 모듈입니다 심지어 콜로이드 현탁액. 생물 과학에 microfluidics의 잠재적 인 영향은 중요하다. microfluidics 기반 assays의 수는 이미 생물학적 시스템의 구조와 기능에 새로운 통찰력을 제공하고, microfluidics 분야는 생물에 영향을 할 것입니다.
Protocol
Discussion
이 논문에서 우리는 마이크로 유체 플랫폼을 사용 높은 처리량의 생성 단백질 배열을위한 방법을 제시한다. 배열 생성은 DNA 템플릿 microarray 인쇄와 마이크로 유체 장치 내의 DNA에서 체외 단백질 발현에 기반을두고 있습니다.
우리 소설 마이크로 유체 플랫폼은 단백질 체학을위한 유망 및 일반 툴을 만들 현재 사용 방법을 통해 몇 가지 중요한 장점을 가지고 있습니다….
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 마리 퀴리 국제 재 통합 보조금에 의해 지원되었다.
Materials
| Reagent/Equipment | Company | Catalogue number |
| PDMS- SYLGARD 184 | Dow Corning USA | ESSEX-DC |
| Chlorotrimethylsilane (TMCS | Sigma-Aldrich | C72854 |
| Epoxy coated glass substrates | CEL Associates USA | VEPO-25C |
| Poly ethylene glycole (PEG) | Sigma-Aldrich | 81260 |
| D-trehalose dihydrate | Sigma-Aldrich | T9531 |
| Biotinylated-BSA | Pierce | PIR-29130 |
| Neutravidin | Pierce | 31050 |
| penta-His-biotin | Qiagen | 34440 |
| Hepes | Biological Industries | 03-025-1B |
| TNT-T7 | Promega | L5540 |
| C-myc Cy3 antibody | Sigma -Aldrich | |
| Control box | Stanford Microfluidics Foundry | |
| Mold | Stanford Microfluidics Foundry | |
| Pin | New England Small Tubes Corporation | |
| Tygon microbore tubing | Tygon | S-54-HL |
| Microarrayer | Bio Robotics | MicroGrid 610 |
| Silicone pins | Parallel Synthesis | SMT-S75 |
References
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