Summary

在成年斑马鱼的生化分析采血车

Published: May 26, 2012
doi:

Summary

本文提出了一种从斑马鱼背主动脉采血技术。它还提供了用于生化分析,如确定胆固醇和甘油三酯水平的试验,取得血清的指示。

Abstract

斑马鱼已被用作研究一些人类疾病的动物模型。它可以作为一个强大的临床前平台的分子事件的研究和治疗策略,以及评估某些疾病的生理机制1。

有成年斑马鱼的生理器官和系统,这可能导致研究人员推断,让斑马鱼系统的勘探所需的基本技术缺乏相对较少的出版物。斑马鱼血液生化值均在2003年首次报道,默撒和同事4人聘用了第一由Jagadeeswaran和他的同事在1999年描述的采血技术。简单地说,血液收集通过微吸管尖端通过外侧切口,长度约0.3厘米,背主动脉的地区5。分钟尺寸的参与,这是因为是一种高精度的技术要求非常熟练的医生。在同组的另一发表在同年6使用相同的技术。在2010年,埃姆斯和他的同事评估整个血糖水平,在斑马鱼7。他们获得了血,用剪刀执行​​斩首和肝素微毛细管收集管插入到胸鳍关节1。他们提到基尔帕特里克工作等为基础的温度适当的存储解决困难与溶血8。当试图在我们的实验室,使用Jagadeeswaran的技术,我们发现这是很难做出正确的地方正是切口,不要让相当数量的血液丢失,才可以开始收集。

近日,Gupta等9描述了如何解剖成年斑马鱼器官中,Kinkle等10描述了如何执行intraperitonEAL注射,Pugach等11描述了如何执行眼窝注射。然而,更多的工作需要更充分地探讨在斑马鱼研究的基本技术。

斑马鱼体积小,使用它作为实验模型的研究人员面临的挑战。此外,由于这种规模狭小,重要的是简单的技术开发,以使研究人员能够探索的斑马鱼模型的优势。

Protocol

1。协议文本之前收集斑马鱼的血液,这是必要的准备麻醉测定的水。水族箱〜200毫升倒入一个500毫升容量的容器。新增〜200克的冰碴儿。温度应约4°C。由于冰块融化,这将是必要的,添加更多的冰块,以保持近4°C的恒温当麻醉测定的水已准备就绪,准备采血所需的材料。提出保留一个低尖上P20的移液器和离开的地方可以很容易地访问的移液器。不要让枪头接触任何污染来源。 </li…

Discussion

本文提出了一种简单的技术,允许进一步的血液和血清分析斑马​​鱼实验。这种技术具有潜力,有助于未来的斑马鱼血液学研究血液中的参数数据。它也应该让更多的斑马鱼作为实验模型的应用。

这种技术不需要特殊技能或实施精确技术。此外,它可实现高达两倍的血液量相对其他技术收集,从而允许使用较少的鱼,以获得所需的生物材料。该技术有一个关键的一步,这?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

FIPE / HCPA – 丰杜Incentivo 1 PesquisaéEventos

短斗篷- CoordenaçãoAperfeiçoamento的Pessoal的Nível高级

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Low retention tips Applied Biosystems 022493020  
Eppendorf Centrifuge 5415D Eppendorf Discontinued  

References

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Citer Cet Article
Pedroso, G. L., Hammes, T. O., Escobar, T. D., Fracasso, L. B., Forgiarini, L. F., da Silveira, T. R. Blood Collection for Biochemical Analysis in Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (63), e3865, doi:10.3791/3865 (2012).

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