将生物探针使用硅烷偶联剂的硅光学生物传感器
Summary
传感器接口与复杂，生物环境，并进行有针对性的结合具有高度特异性的探针，通过表面改性传感器的高灵敏度的传感器检测。在这里，我们展示了硅光传感器使用硅烷偶联剂弥合传感器和生物环境与生物素的表面功能。
Abstract
为了与生物环境，生物传感器平台，如流行的Biacore系统（基于表面等离子体共振（SPR）技术），接口，利用各种表面改性技术，例如，可以防止表面污垢，调整表面的疏水/亲水性，适应各种电子环境，最频繁，诱导特异性对利益的目标。1-5这些技术其他高度敏感的生物传感器的功能扩展到现实世界的复杂环境中应用，例如虽然商业化的生物传感平台，如Biacore，如血液，尿液和废水分析。2,6-7很好地理解，标准执行等表面改性技术，这些技术还没有被翻译在一个标准化的方式向其他标签免费的生物传感平台，如回音壁模式（WGM公司）光学谐振器。8-9 < / P>
WGM公司的光学谐振腔的有前途的技术代表进行无标签的超低浓度的物种种类繁多的检测6,10-12灵敏度高，这些平台是其独特的几何光学的结果：WGM公司的光学谐振腔局限循环13一样的SPR平台在具体的，整体的共振频率的光，光场未完全密闭的感应装置，但evanesces;这个“消逝的尾巴”，可以与周围环境中的物种相互作用。这种相互作用导致改变光场的有效折射率，造成轻微的，但检测，转向装置的共振频率。由于光场的循环，它可以与环境互动多次，导致固有的信号放大，非常高的敏感性，环境中的细微变化。2,14-15
帐篷“要在复杂环境中进行有针对性的检测，这些平台必须与探针分子（通常是一个半有约束力的对，如抗体/抗原）通过表面改性。配对虽然WGM公司光学谐振器，可以在几个几何捏造各种材料系统，是最常见的二氧化硅微球，这些球一般制作光纤，它提供了一个“干”的微可以在官能和检测实验处理结束。二氧化硅表面化学适用于附加到其表面的探针分子，然而，为平面的基板上生成的传统技术往往没有足够的这些三维结构，微球表面的任何变化（灰尘，污染，表面缺陷，不均匀涂料）可以有严重的消极后果，对他们的检测能力。在这里，我们展示了一个浅显的方法WGM公司使用硅烷偶联剂，无机表面和生物环境，弥合素连接到硅表面硅微光学谐振腔的表面官能。8,16，虽然我们使用本报告中的传感器系统的硅微WGM公司谐振器，协议是通用的，可用于任何硅器件表面的功能化与生物素。Protocol
1。背景通过一个简单的三个步骤（ 图1），生物素连接到这些设备的表面。首先，我们将表面清洗干净，并填充羟基暴露要么氧等离子体或食人鱼解决方案的设备，它。第二，我们使用气相沉积重视终止与伯胺通过水解和缩合反应的羟基硅烷偶联剂。第三，我们重视通过N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯化学表面的生物素。我们直接选择这些技术有兴趣的读者，我们以前…
Discussion
在协议中所述，我们创建了一个平台，住房，运输整个功能化过程中的硅胶微球其茎。这房屋平台创建作为解决表面污染和破坏，导致微接触的整个官能过程中使用的各种容器的墙壁。我们意识到，不断地安装和拆卸功能化过程中个人微不同的容器中出现的主要困难。这是难以避免的打击对象刷牙微用镊子移动时，每个单独持有到茎。稳定在载玻片上的每一个微球的位置，我们可以简单地在不同?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者非常感谢在南加州大学教授安德烈·阿玛尼在此协议的支持。由国家科学基金会为这项工作的初步发展提供了资金[085281和1028440]和国立卫生研究所通过美国国立卫生研究院主任的新的创新奖励计划1DP2OD007391-01]。其他信息可在http://web.missouri.edu/〜hunthk / 。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Methanol | Fisher | 67-56-1 | ACS grade |
| Sulfuric Acid | Fisher | 8014-95-7 | Fuming |
| Hydrogen Peroxide | Fisher | 7722-84-1 | 30 wt % |
| Aminopropyltrimethoxysilane | Fisher | 13822-56-5 | |
| NHS-biotin EZ linker | Pierce | 20217 | |
| Dimethylsulfoxide | Fisher | 67-68-5 | Anhydrous |
| Fluorescein Isothiocyanate | Pierce | 46425 | |
| Phosphate Buffered Saline | Fisher | 7647-14-5 | Powder concentrate |
| Sodium Bicarbonate Buffer | Fisher | NC0099321 | |
| Texas Red – Avidin Conjugate | Pierce | A820 | |
| Optical Fiber | Newport | F-SC | |
| Fiber Stripper | Fiber Instrument Sales | NN-175 | No-Nik 175 um stripper |
| Kimwipes | Fisher | 06666A | |
| Bare Fiber Cleaver | Ilsintech | Cl-03A | |
| Glass Microscope Slides | Fisher | 12-550B | |
| Polypropylene Vials | Fisher | 03-341-75A | 60 mL, hinged cap |
| Incubating Rocker | VWR | 12620-910 | |
| Vacuum Desiccator | Fisher | 08-594-15B |
References
- Datar, R. Cantilever Sensors: Nanomechanical Tools for Diagnostics. MRS Bull. 34, 449-454 (2009).
- Hunt, H. K., Armani, A. M. Label-free biological and chemical sensors. Nanoscale. 2, 1544-1559 (2010).
- Sundberg, F., Karlsson, R. Rapid detection and characterization of immune responses using label-free biacore immunoassays. Immunology. 120, 46-47 (2007).
- Hermanson, G. T. . Bioconjugate Techniques. , (2008).
- Bernards, M. T., Cheng, G., Zhang, Z., Chen, S. F., Jiang, S. Y. Nonfouling polymer brushes via surface-initiated, two-component atom transfer radical polymerization. Macromolecules. 41, 4216-4219 (2008).
- Fan, X. D. Sensitive optical biosensors for unlabeled targets: A review. Anal. Chim. Acta. 620, 8-26 (2008).
- Qavi, A. J., Washburn, A. L., Byeon, J. Y., Bailey, R. C. Label-free technologies for quantitative multiparameter biological analysis. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 394, 121-135 (2009).
- Hunt, H. K., Soteropulos, C., Armani, A. M. Bioconjugation Strategies for Microtoroidal Optical Resonators. Sensors. 10, 9317-9336 (2010).
- Kalia, J., Raines, R. T. Advances in Bioconjugation. Curr. Org. Chem. 14, 138-147 (2010).
- Matsko, A. B., Savchenkov, A. A., Strekalov, D., Ilchenko, V. S., Maleki, L. Review of Applications of Whispering-Gallery Mode Resonators in Photonics and Nonlinear Optics. IPN Progress Report. , 42-162 (2005).
- Armani, A. M., Kulkarni, R. P., Fraser, S. E., Flagan, R. C., Vahala, K. J. Label-free, single-molecule detection with optical microcavities. Science. 317, 783-787 (2007).
- Zhu, J. On-chip single nanoparticle detection and sizing by mode splitting in an ultrahigh-Q microresonator. Nat. Photon. 4, 122-122 (2010).
- Armani, D. K., Kippenberg, T. J., Spillane, S. M., Vahala, K. J. Ultra-high-Q toroid microcavity on a chip. Nature. 421, 925-928 (2003).
- Vollmer, F., Arnold, S. Whispering-gallery-mode biosensing: label-free detection down to single molecules. Nat. Methods. 5, 591-596 (2008).
- Vollmer, F., Arnold, S., Keng, D. Single virus detection from the reactive shift of a whispering gallery mode. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20701-20704 (2008).
- Hunt, H. K., Armani, A. M. Recycling microcavity optical biosensors. Opt. Lett. 36, 1092-1094 (2011).
- Soteropulos, C. E., Hunt, H. K., Armani, A. M. Determination of binding kinetics using whispering gallery mode microcavities. Appl. Phys. Lett. 99, 103703-103703 (2011).
Tags
Biological ProbesSilica Optical BiosensorsSilane Coupling AgentsSurface Modification TechniquesHydrophobicityHydrophilicityElectronic EnvironmentsSpecificityLabel-free Biosensing PlatformsWhispering Gallery Mode (WGM) Optical ResonatorsUltra-low ConcentrationsGeometric OpticsResonance FrequenciesEvanescent Tail
Citer Cet Article
Soteropulos, C. E., Hunt, H. K. Attaching Biological Probes to Silica Optical Biosensors Using Silane Coupling Agents. J. Vis. Exp. (63), e3866, doi:10.3791/3866 (2012).