Indsamlingen af inficeret skovflåt hæmolymfe, spytkirtler, og spyt er vigtigt at undersøge, hvordan skovflåtbåren patogener forårsage sygdom. I denne protokol vi vise, hvordan man indsamler hæmolymfe og spytkirtler fra fodring<em> Ixodes scapularis</em> Nymfer. Vi har også demonstrere spyt samling af kvindelige<em> I. scapularis</em> Voksne.
Flåter findes over hele verden og plage mennesker med mange kryds-bårne sygdomme. Flåter er vektorer for patogener, der forårsager borreliose og skovflåtbåren recidiverende feber (Borrelia spp.), Rocky Mountain spotted fever (Rickettsia rickettsii), ehrlichiosis (Ehrlichia chaffeensis og E. equi), anaplasmose (Anaplasma phagocytophilum), encephalitis (tick- borne encephalitis virus), babesiose (Babesia spp.), Colorado tick fever (Coltivirus) og tularæmi (Francisella tularensis) 1-8. For at blive ordentligt overføres til værten disse smitstoffer differentielt regulerer genekspression, interagere med tick proteiner, og vandrer gennem kryds 3,9-13. For eksempel, tilpasser Lyme sygdomsagensen, Borrelia burgdorferi, gennem differentiel genekspression til festen og hungersnød stadier af skovflåten har enzootisk cyklus 14,15. Som en Ixodes kryds forbruger enblodmel Borrelia replikere og migrere fra mellemtarmen i hemocoel, hvor de rejser til spytkirtlerne og transmitteres i værten med den udstødte spyt 9,16-19.
Som et flueben feeds værten typisk reagerer med en stærk hæmostatisk og medfødte immunrespons 11,13,20-22. Til trods for disse værtsresponser, I. scapularis kan foder til flere dage, fordi tick spyt indeholder proteiner, der er immunmodulerende, lytiske agenter, antikoagulanter og fibrinolysins at hjælpe skovflåten fodring 3,11,20,21,23. De immunmodulerende aktiviteter besat af tick spyt eller spytkirtel ekstrakt (SGE) lette fremsendelsen, spredning og formidling af talrige tick patogener 3,20,24-27. For yderligere at forstå, hvordan skovflåtbåren smitstoffer forårsage sygdom er det vigtigt at dissekere aktivt fodring flåter og indsamle tick spyt. Videoen protokol viser dissektion teknikker tilindsamling af hæmolymfe og fjernelse af spytkirtler fra aktivt at fodre I. scapularis nymfer efter 48 og 72 timer efter mus placering. Vi har også demonstrere spyt samling fra en voksen kvinde I. scapularis tick.
Indsamlingen af tick hæmolymfe, spytkirtler, og spyt er vigtig i studiet af skovflåtbåren patogen transmission, udbredelse, formidling, spredning og persistens i både kryds og værten 6,11-13,20,23,29. Der er flere måder at dissekere en flåt 30,31. Men i forbindelse med indsamling spytkirtler er det afgørende at dissekere den skovflåten ordentligt, så spytkirtlerne ikke brydes eller tabt i skovflåten resterne. Når de spytkirtlerne fjernes fra blodmiden de skal vaskes adskillige gange for…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne vil gerne takke afdelingen for vektorbårne sygdomme Animal Resources Branch, især Andrea Peterson, Lisa Massoudi, Verna O'Brien, og John Liddell for deres pleje og vedligeholdelse af mus og kaniner. Vi vil også gerne takke Amy Ullmann, Theresa Russell, og Barbara J. Johnson for deres bidrag til at dette manuskript. Endelig vil vi gerne anerkende, Alissa Eckert i kontoret for Associate Director for Kommunikation på CDC for at producere de grafiske illustrationer og Judy Lavelle for at lede alle de Betegnelser i forbindelse med optagelserne af dette manuskript.
Reagent | Company | Catalogue Number |
Hydrogen peroxide | Fisher | H312-500 |
Ethanol | Acros | 61509-5000 |
PBS | Boston Bioproducts | BM-2205 |
Dumont Fine forceps (3C) | Fisher | NC9906085 |
Silane treated microscope slides | Bioworld | 42763007-1 |
Pap pen | Bioworld | 21750008-1 |
Super frost plus microscope slides | Fisher | 12-550-18 |
Pilocarpine | Sigma | P6503-5G |
Protease inhibitor cocktail | Sigma | P2714 |
#11 disposable scalpel | Feather | 2975#11 |
Nontoxic modeling clay | Fisher | S17307 |
Capillary tubes | Chase scientific Glass, inc | 40A502 |