Summary

心筋虚血再灌流障害のマウスクローズド胸モデル

Published: July 17, 2012
doi:

Summary

外科手術による外傷、炎症反応を誘導する。サイトカイン、内因性リガンドは、虚血再灌流後に心筋梗塞サイズを調節することが知られています。我々は、開胸の影響を最小限に抑えるためにぶら下がって重みを使用してマウスの虚血再灌流の変更されたクローズド·胸のモデルを提示します。

Abstract

冠状動脈結紮の開胸モデルにおける開胸による外科手術による外傷、虚血再灌流に関与するさまざまなメカニズムを変更する免疫応答を誘導する。免疫応答は、自然免疫受容体の内因性リガンドのサイトカイン発現および放出または分泌が含まれています。自然免疫の活性化は、潜在的に梗塞サイズを調節することができる。我々は、心筋プリpostconditioningと心筋虚血再灌流における自然免疫の役割を研究するための役に立つかもしれませんぶら下がって重みを使用して、既存のマウスクローズド胸モデルを変更しました。このモデルでは、動物は心筋虚血の発症前に外科手術による外傷から回復することができます。

揮発性麻酔薬は、熱心に研究されており、虚血性心のために彼らの前処理効果はよく知られています。しかし、この保護効果は、冠動脈結紮の開胸モデルにおけるその使用を排除します。したがって、別の利点は番目の利用可能性慢性閉胸モデルの計測のためのeうまく制御揮発性麻酔薬は、その前処理の効果は72時間まで持続するからである。間欠的な虚血と複数のヒットモデルと慢性心疾患は、このモデルの他の可能なアプリケーションです。

慢性閉胸モデルでは、気管内挿管と換気のマウスは、第四肋間を介して横方向の鈍胸を受けています。字を左前次の識別は、容器の下に渡され、両方の縫合糸の端は、オクルーダ通しています。その後、両方の縫合糸の端がループを形成するために結ばれ、胸壁を通過して皮下組織に残されます。胸閉鎖と5日間の回復後、マウスを再度麻酔ですが、胸の皮膚が再開され、絞首刑の重みはECG制御下にあるループにフックアップされています。

虚血/再灌流プロトコルの終わりに、心は脳梗塞のためにTTCで染色す​​ることができますサイズは、アセスメントや組織学および免疫組織化学に加えて形態学的研究を可能にするために灌流固定を受けています。

Protocol

1。麻酔導入イソフルランと誘導するために、3.0体積%および0.5 L / minの酸素流量に蒸気·セットに接続されているインダクションボックスにマウスを置きます。 無意識が応答しないという前肢や後肢ペダル撤退反射を誘発するために失敗した触覚刺激によって達成された後、仰臥位で温度制御された手術台の上にマウスを置きます。インダクションボックスを経由して蒸気に?…

Discussion

我々は左側臥肋間開胸を介して心臓にアクセスし、左鎖骨中央線で胸部にLAD縫合糸を導くことによってマウスクローズド胸モデルを変更しました。骨胸郭はそのままにして、外傷を最小限に抑えるため鎮痛剤、手術部位感染に必要な、したがって、回復を促進します。左内哺乳類動脈を維持することで電気焼灼器は必要ありません。我々は、後で簡単にアクセスするための皮下組織の縫合糸?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我々は、灌流固定技術に関する彼のアドバイスをダニエルDuerrに感謝します。

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number
Vapor Drägerwerk AG Isoflo
Microscope Leica M80
Light source Schott KL 1500 LCD
Homeothermic Blanket Control Unit Harvard Apparatus  
MiniVent Type 845 Hugo Sachs Elektronik  
8-0 Prolene Ethicon BV130-5 6.5mm 3/8c
6-0 Prolene Ethicon BV-1 9.3 mm 3/8c
Kalt suture needle size 3 FST 12050-03
Triphenyltetrazolium Sigma Aldrich 93145
Phthalo blue Heucotech LTD  
PowerLab ADInstruments  

References

  1. Lim, S. Y., Davidson, S. M., Hausenloy, D. J., Yellon, D. M. Preconditioning and postconditioning: the essential role of the mitochondrial permeability transition pore. Cardiovasc. Res. 75, 530-535 (2007).
  2. Eckle, T., Koeppen, M., Eltzschig, H. Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice. J. Vis. Exp. (50), e2526 (2011).
  3. Michael, L. H. Myocardial infarction and remodeling in mice: effect of reperfusion. Am. J. Physiol. 277, H660-H668 (1999).
  4. Nossuli, T. O. A chronic mouse model of myocardial ischemia-reperfusion: essential in cytokine studies 52. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 278, H1049-H1055 (2000).
  5. Irwin, M. W. Tissue expression and immunolocalization of tumor necrosis factor-alpha in postinfarction dysfunctional myocardium 846. Circulation. 99, 1492-1498 (1999).
  6. Michael, L. H. Creatine kinase and phosphorylase in cardiac lymph: coronary occlusion and reperfusion. Am. J. Physiol. 248, 350-359 (1985).
  7. Tonkovic-Capin, M. Delayed cardioprotection by isoflurane: role of K(ATP) channels 765. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 283, H61-H68 (2002).
  8. Tsutsumi, Y. M. Role of caveolin-3 and glucose transporter-4 in isoflurane-induced delayed cardiac protection. Anesthesiology. 112, 1136-1145 (2010).
  9. Benedict, P. E., Benedict, M. B., Su, T. P., Bolling, S. F. Opiate drugs and delta-receptor-mediated myocardial protection. Circulation. 100, II357-II360 (1999).
  10. Ren, X., Wang, Y., Jones, W. K. TNF-alpha is required for late ischemic preconditioning but not for remote preconditioning of trauma. J. Surg. Res. 121, 120-129 (2004).
  11. Andrassy, M. High-mobility group box-1 in ischemia-reperfusion injury of the heart. Circulation. 117, 3216-3226 (2008).
  12. Kim, S. C. Extracellular heat shock protein 60, cardiac myocytes, and apoptosis. Circ. Res. 105, 1186-1195 (2009).
  13. Lin, L. HSP60 in heart failure: abnormal distribution and role in cardiac myocyte apoptosis. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 293, 2238-2247 (2007).
check_url/fr/3896?article_type=t

Play Video

Citer Cet Article
Kim, S., Boehm, O., Meyer, R., Hoeft, A., Knüfermann, P., Baumgarten, G. A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion. J. Vis. Exp. (65), e3896, doi:10.3791/3896 (2012).

View Video