العزلة والثقافة الأساسي في الخلايا الكبدية الجرذ
Summary
خلايا الكبد الأولية توفير أداة قيمة لتقييم البيوكيميائية، وظائف الجزيئية، والتمثيل الغذائي في نظام تجريبي ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية. وصفنا بروتوكول موثوق لفأر في تروية الكبد الموقع، الذي يولد باستمرار خلايا الكبد قادرة على البقاء حتى to1.0 × 10<sup> 8</sup> خلايا في إعداد مع بقاء الخلية بين 88 ~ 96٪.
Abstract
الابتدائية ثقافة الكبدية هو أداة قيمة التي استخدمت على نطاق واسع في مجال البحوث الأساسية من وظائف الكبد، والأمراض، الفيزيولوجيا المرضية الصيدلة، والمواضيع الأخرى ذات الصلة. قدم للمرة الأولى في طريقة تقوم على نضح كولاجيناز من خطوتين لعزل خلايا الكبد سليمة من قبل بري وصديق في عام 1969 (1) ومنذ ذلك الحين، شهدت العديد من التعديلات. وقد وصفت هذه التقنية الأكثر استخداما من قبل Seglenin 1976 2. في الأساس، هي خلايا الكبد فصلها عن الجرذان الكبار تخدير عن طريق نضح كولاجيناز عدم اعادة توزيع من خلال الوريد البابي. ثم يتم تصفية الخلايا المعزولة من خلال 100 ميكرون فلتر حجم المسام شبكة النايلون، وتربيتها على لوحات. بعد 4 ساعات والثقافة، ويتم استبدال المتوسطة مع المتوسطة المحتوية على مصل أو مصل الحرة، على سبيل المثال HepatoZYME-SFM، لمزيد من الوقت لثقافة. هذه الإجراءات تتطلب خطوات ثقافة الجراحية والعقيمة التي يمكن البرهنة على نحو أفضل عن طريق الفيديو من قبل النص. Hيحرث، ونحن توثيق خطوات مفصلة لهذه الإجراءات من قبل كل من الفيديو وبروتوكول مكتوب، والتي تسمح باستمرار في توليد خلايا الكبد قادرة على البقاء في أعداد كبيرة.
Protocol
Discussion
ثقافة الرئيسي للخلايا الكبد هو نموذج في المختبر تستخدم على نطاق واسع لدراسة جوانب مختلفة من علم وظائف الأعضاء وعلم الأمراض في الكبد. على سبيل المثال، يتم استخدام الثقافة الأولية لتقييم التعبير وظيفة الإنزيمات المخدرات التأييض بما في ذلك السيتوكرومات P450، والتم…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
فإن الكتاب أود أن أشكر السيد جوش Basford والدكتور لى شياو مين لتقديم المساعدة التقنية. وأيد هذا العمل في جزء من منح المعاهد الوطنية للصحة (DK70992 وDK92779 إلى ML).
References
- Berry, M. N., Friend, D. S. High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells: a biochemical and fine structural study. J. Cell Biol. 43, 506-520 (1969).
- Seglen, P. O. Preparation of isolated rat liver cells. Methods Cell Biol. 13, 29-83 (1976).
- Saito, K., Kobayashi, K., Mizuno, Y., Fukuchi, Y., Furihata, T., Chiba, K., Schmidt, M., Schmitz, H. J., Baumgart, A., Guedon, D. Peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) agonists induce constitutive androstane receptor (CAR) and cytochrome P450 2B in rat primary hepatocytes. Drug Metab. Pharmacokinet. 25, 108-111 (2010).
- Gomez-Lechon, M. J., Donato, M. T., Castell, J. V., Jover, R. Human hepatocytes in primary culture: the choice to investigate drug metabolism in man. Curr. Drug Metab. 5, 443-462 (2004).
- Goncalves, L. A., Vigario, A. M., Penha-Goncalves, C. Improved isolation of murine hepatocytes for in vitro malaria liver stage studies. Malar. J. 6, 169 (2007).
- Bu, S. Y., Mashek, D. G. Hepatic long-chain acyl-CoA synthetase 5 mediates fatty acid channeling between anabolic and catabolic pathways. J. Lipid Res. 51, 3270-3280 (2010).
- Aiken, J., Cima, L., Schloo, B., Mooney, D., Johnson, L., Langer, R., Vacanti, J. P. Studies in rat liver perfusion for optimal harvest of hepatocytes. J. Pediatr. Surg. 25, 140-144 (1990).
- Jauregui, H. O., McMillan, P. N., Hevey, K., Naik, S. A quantitative analysis of lectin binding to adult rat hepatocyte cell surfaces. In Vitro Cell. 24, 401-412 (1988).
- Klaunig, J. E., Goldblatt, P. J., Hinton, D. E., Lipsky, M. M., Trump, B. F. Mouse liver cell culture. II. Primary culture. In Vitro. 17, 926-934 (1981).
- Hay, R. J. Operator-induced contamination in cell culture systems. Dev. Biol. Stand. 75, 193-204 (1991).
