Filtri di lana di vetro per la raccolta virus a base acquosa e agricole agenti patogeni zoonotici
Summary
I filtri di lana di vetro sono stati utilizzati per concentrare i virus acquosa da un certo numero di gruppi di ricerca in tutto il mondo. Qui mostriamo un metodo semplice per la costruzione di filtri di lana di vetro e di dimostrare i filtri sono anche efficaci in concentrazione acquosa virali e patogeni batterici e protozoi.
Abstract
Il primo passo fondamentale per la valutazione dei livelli di agenti patogeni in sospetto di acqua contaminata è la concentrazione. Metodi di concentrazione tendono a essere specifica per un gruppo particolare agente patogeno, per esempio gli Stati Uniti Metodo Environmental Protection Agency 1623 per Giardia e Cryptosporidium 1, il che significa che più metodi sono necessari se il programma di campionamento di mira più di un gruppo patogeno. Un altro svantaggio dei metodi attuali è l'apparecchiatura può essere complicato e costoso, per esempio il metodo VIRADEL con cartuccia filtrante per concentrare il virus 1MDS 2. In questo articolo abbiamo descritto come creare filtri in lana di vetro per concentrare gli agenti patogeni a base acquosa. Dopo eluizione filtro, il concentrato è suscettibile ad una fase di seconda concentrazione, come centrifugazione, seguita da patogeno rilevamento e conteggio con metodi culturali o molecolari. I filtri sono diversi vantaggi. La costruzione è semplice ed i filtri possono essere costruiti ad unadimensioni ny per soddisfare le esigenze specifiche di campionamento. Le parti del filtro sono poco costosi, che permettono di raccogliere un gran numero di campioni senza incidere negativamente un bilancio del progetto. Grandi volumi di campione (100s a 1.000 s L) può essere concentrata a seconda del tasso di intasamento di torbidità. I filtri sono facilmente trasportabili e con attrezzatura minima, come una pompa e misuratore di portata, possono essere attuate in campo per il campionamento dell'acqua finito di bere, acque superficiali, sotterranee e scarichi agricoli. Infine, filtrazione lana di vetro è efficace per concentrare una varietà di tipi di patogeni così solo metodo è necessario. Qui riportiamo l'efficacia del filtro di concentrazione acquosa enterovirus umani, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum, e il virus dell'influenza aviaria.
Protocol
Discussion
I filtri di lana di vetro sono stati utilizzati da vari gruppi di ricerca a concentrarsi 3,5,6 virus enterici umani da una varietà di fonti d'acqua, come acqua potabile finito 7, 8,9 acque sotterranee, acque di superficie 10, 11 di acqua di mare, acque reflue 12, e scarichi agricoli 13. Qui riportiamo i filtri sono efficaci anche a concentrare il virus dell'influenza aviaria così come i patogeni batterici e protozoi Salmonella enterica (sierotipo …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ringraziamo William T. Eckert per raccontare il video. Sviluppo del protocollo di lana di vetro faceva parte del Water Wisconsin e Trial Salute per rischi enterica (WAHTER Study), finanziato dalla US EPA STAR di Grant R831630. Alaska campioni sono stati raccolti da A. Reeves, A. Ramey, e B. Meixell con il sostegno finanziario USGS. Qualsiasi uso di nomi commerciali, prodotto o azienda è per scopi descrittivi soltanto e non implica riconoscimento alcuno da parte del governo degli Stati Uniti.
Materials
| Name of reagent or item | Company | Catalogue number |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | A144-500 |
| Sodium hydroxide | Fisher Scientific | BP359-212 |
| Phosphate Buffered Saline Sodium chloride Potassium phosphate-dibasic Potassium phosphate-monobasic |
Fisher Scientific Fisher Scientific Fisher Scientific |
BP358-212 BP363-500 BP362-500 |
| Sodium hypochlorite i.e., household bleach | The Clorox Co. | |
| Sodium thiosulfate, anhydrous | Fisher Scientific | S 475-212 |
| Beef extract, desiccated | Becton, Dickinson and Company | 211520 |
| Glycine | Fisher Scientific | G46-500 |
| Oiled sodocalcic glass wool
Or R-11 unfaced fiberglass insulation |
Isover
Johns Manville |
Bourre 725 QN |
| Polypropylene mesh | Industrial Netting | xN4510 |
| 2″x4″ Sch 80 PVC threaded pipe nipple | Grainger | 6MW35 |
| 2″ Sch 40 PVC cap | Grainger | 5WDW3 |
| Male adapter nylon fitting (1/2″x1/2″) | US Plastic Corp. | 62178 |
| Sample bottles for eluate- 1 liter | Fisher Scientific | 03-313-4F |
| 60 mL syringe | Fisher Scientific | NC9661991 |
| pH strips | Whatman | 2614 991 |
| Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm | McMaster-Carr | 4411K75 |
| Prefilter housing | Cole-Parmer | S-29820-10 |
References
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