Planarian의 부동화, 부분 조사 및 조직 이식
Summary
planaria 사이에 정의하고 일관성있는 크기의 조직을 접목을위한 효과적인 방법이 설명되어 있습니다. 또한 이식에 사용되는 고정 기법이 살아있는 동물의 부분 조사를위한 리드 방패와 함께, 적응하는 방법에 대한 설명이 포함되어 있습니다.
Abstract
planarian, 담수 flatworm은 metazoan 재생 및 줄기 세포 생물학 1,2를 해부를위한 강력한 시스템을 것으로 입증되었습니다. 모든 없거나 손상된 조직의 Planarian 재생이 neoblasts 3 되나 성인 줄기 세포에 의해 가능하게된다. 이러한 줄기 세포는 정말 로요 pluripotent과 전체 동물 4 reconstituting의 singularly 가능한 것으로 표시되었습니다 있지만, 줄기 세포 인구와 그 세포 행동의 역학 내에서 이질이 크게 해결되지 않은 상태로 유지됩니다. 큰 번호와 planarian 본문 계획 전반에 걸쳐 줄기 세포의 광범위한 배포로 인해 생체내 분자와 기능성 연구를 위해 줄기 세포의 subpopulations 조작을위한 고급 방법이 필요하다.
조직 이식과 부분적인 조사는 planarian 줄기 세포의 subpopulation가 진학 격리 수있는가 두 가지 방법이 있습니다. 각 기술은 뚜렷한 장점이 있습니다. 티문제는 이식도 본질적으로 유전적으로 뚜렷한 있거나 이전에 pharmacologically 처리되었습니다 순진 호스트로, 줄기 세포의 도입을 허용합니다. 또한, 부분 조사는 상처의 도입이나 조직 통합에 볼기없이 줄기 세포를 찾아볼 수없는 조직으로 juxtaposed 호스트 내에서 줄기 세포의 고립을 허용합니다. 이러한 두 가지 방법을 사용, 하나는 세포 자율이 아닌 자율적인 요인을 조사할 수 있도록 증식, 분화, 및 마이 그 레이션과 같은 제어 줄기 세포 기능.
조직 이식 5,6와 부분적인 방사선 일곱 모두 오늘날 공부 밑에 남아 planarian 중생에 대한 질문이 많은 정의에서 역사적으로 사용되었습니다. 그러나 이러한 기술은 이전 방법의 힘드는과 일관성없는 성격으로 인해 underused 살아남았습니다. 여기에 제시된 프로토콜은 시간 감소에 앞으로 큰 단계를 나타냅니다차 reproducibly 100 %에 접근 efficacies로 이식할 또는 부분적으로 조사 동물의 다수를 생성하기 위해 필요한 노력. 우리는 큰 동물의 문화, 부동화, 부분 조사, 조직 이식을위한 준비, 그리고 동물의 복구 최적화를 포괄합니다. 또한, 여기에 설명된 작업은 가장 널리 연구 planarian, Schmidtea 메디 테라 니아와 함께 사용하기위한 부분적인 조사 방법의 첫 번째 응용 프로그램을 보여줍니다. 또한 planaria에 접목 효율적인 조직은 오래 포유류 8 성인 줄기 세포의 잠재력을 시금의 골드 표준 방법되었습니다 repopulation의 assays의 순진하거나 치료 줄기 세포의 subpopulations의 기능 테스트를위한 문을 엽니다. 이러한 기술의 광범위한 채택은 조직 항상성 및 재생 중에 성인 줄기 세포의 세포 행동의 이해에 리드 의심하지 않습니다.
Protocol
Discussion
고정의 중요성
고정이하여 지금까지 이러한 프로세스 중 하나의 성공적인 완성을위한 가장 중요한 단계입니다. planaria 부적 절한 부분적인 조사에 앞서 움직일 수있다면, 그들은 일관성과 혼란함을 주죠 결과를 생산, 리드 방패 아래에 이동할 수 있습니다. 동물이 충분 이식에 따라 움직일 수있다면 또한, 호스트 웜은 가능성이 호스트에 적절하게 치료 이식의 실패 결과, 이식 …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 이러한 기술의 개발 중에 귀중한 논의에 대한 planarian 이식에 관한 유용한 조언뿐만 아니라 산체스 실험실의 과거와 현재 회원 Chiyoko 고바야시와 Kiyokazu 아가타에게 감사를 표합니다. 이 작품은 OCG와 ASA로 NIH R37GM057260에 NIH 연수 부여 (5T32 HD0791)에 의해 지원되었다. ASA는 하워드 휴즈 의학 연구소의 탐정이다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| General Purpose Transfer Pipette | Samco | 691 |
| Capillary tubes (ID 0.75 mm) | FHC | 30-30-0 |
| Capillary tubes (OD 0.7 mm) | FHC | 30-50-08 |
| Parafilm M | VWR | 52858-076 |
| Kimwipes 34155 | VWR | 500029-891 |
| Black filter paper | Schleicher & Schuell | 10310809 |
| Whatman #2 filter paper 1002-055 | Fisher Scientific | 09-810B |
| Whatman #3 filter paper 1003-185 | Fisher Scientific | 09-820E |
| Cigarette rolling paper | Zig-Zag, original | NA |
| Petri dishes | VWR | 82050-544 |
| Forceps DUMONT, INOX #5 | FST | 11251-20 |
| Chloretone | Sigma Aldrich | 112054 |
| Casein | Sigma Aldrich | C3400 |
| Lead Shields | Alpha Systems Corp., Bluffdale, UT | Custom design |
| XRAD-320 Biological Irradiator | Precision X-Ray, North Branford, CT | NA |
References
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