プラナリアの固定化、部分照射し、組織移植
Summary
プラナリアの間に定義された一貫性のある大きさの組織を移植するための効果的な方法が記載されている。も含まれて移植に使用される固定化技術が生きた動物の部分的な照射のために、鉛の盾と一緒に、適合させることができる方法の説明です。
Abstract
プラナリア、淡水扁形動物は、後生動物の再生と幹細胞生物学1,2を解剖するための強力なシステムであることが判明した。欠落または損傷した組織のプラナリア再生は成体幹細胞によって実現されていますneoblasts 3と呼ばれる。これらの幹細胞が決定的に多能性と全体の動物の4を再構成するの単独で可能であることが示されているが、幹細胞集団とそれらの細胞の行動のダイナミクス内の不均一性は、主に未解決のままである。多数とプラナリアのボディプラン全体の幹細胞の広範な分布のために、in vivoでの分子および機能的研究のための幹細胞の集団を操作するための高度な手法が必要とされている。
組織移植と部分的な照射プラナリア幹細胞の集団がさらなる研究のために分離することのできる2つの方法です。各手法は、異なる利点があります。 T問題移植のいずれかの本質的に遺伝的に異なっている、または以前に薬理学的に扱われているライブラリー – 全曲無料試聴できるホストに、幹細胞の導入を可能にします。また、部分照射は、創傷の導入や組織の整合性の任意の逆子なく、幹細胞を欠いている組織に並置ホスト内で幹細胞の単離を可能にします。これら二つのメソッドを使用して、1つは、増殖、分化、および移行などの幹細胞機能を制御する細胞自律非自律因子を調べることができます。
組織移植5,6および部分照射7の両方が、今日研究されて残っているプラナリアの再生に関する質問の多くを定義するのに歴史的に使用されている。しかし、これらの技術は、従来の方法の骨の折れると矛盾した性質のために十分に活用残っています。ここで提示されたプロトコルは、時間を減少させる前方に大きな一歩を表してND再現性100％に近い効能を持つグラフトまたは部分的に照射した動物を大量に生成するために必要な努力。我々は、大型動物の培養、固定化、部分的な照射のための準備、組織移植、動物の回復の最適化をカバーしています。さらに、ここで説明する作業は、最も広く研究されているプラナリア、Schmidteaメディで使用するための部分的な照射法の最初のアプリケーションを示しています。さらに、プラナリアに移植効率的な組織が 長い哺乳類8に成体幹細胞の可能性をアッセイの金の標準的な方法されている再投入アッセイにおけるナイーブまたは処理された幹細胞の集団の機能テストのためにドアを開きます。これらの技術の幅広い採用は組織の恒常性や再生中の成体幹細胞の細胞挙動の理解につながるのは間違いない。
Protocol
Discussion
固定化の重要性
固定化ははるかにこれらのプロセスのいずれかが正常に完了するための最も重要なステップです。プラナリアが不適切な部分照射の前に固定化されている場合、それらは矛盾した交絡結果を生成し、鉛シールドの下に移動する可能性があります。動物が不十分移植後の固定化している場合はさらに、ホストのワームは、おそらくホストに適切に癒すために移…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、これらの技術の開発時に貴重な議論のためにプラナリア移植に関するアドバイスだけでなく、サンチェス·ラボの過去と現在のメンバーの千代子小林清和アガタに感謝します。この作品は、OCGおよびASAにNIH R37GM057260にNIHのトレーニンググラント（5T32 HD0791）によってサポートされていました。 ASAは、ハワードヒューズ医学研究所の研究者でもある。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| General Purpose Transfer Pipette | Samco | 691 |
| Capillary tubes (ID 0.75 mm) | FHC | 30-30-0 |
| Capillary tubes (OD 0.7 mm) | FHC | 30-50-08 |
| Parafilm M | VWR | 52858-076 |
| Kimwipes 34155 | VWR | 500029-891 |
| Black filter paper | Schleicher & Schuell | 10310809 |
| Whatman #2 filter paper 1002-055 | Fisher Scientific | 09-810B |
| Whatman #3 filter paper 1003-185 | Fisher Scientific | 09-820E |
| Cigarette rolling paper | Zig-Zag, original | NA |
| Petri dishes | VWR | 82050-544 |
| Forceps DUMONT, INOX #5 | FST | 11251-20 |
| Chloretone | Sigma Aldrich | 112054 |
| Casein | Sigma Aldrich | C3400 |
| Lead Shields | Alpha Systems Corp., Bluffdale, UT | Custom design |
| XRAD-320 Biological Irradiator | Precision X-Ray, North Branford, CT | NA |
References
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