의 분자 메커니즘의 특성<em> 생체에</em> UVR 유도 백내장
Summary
백내장은 세계에서 실명의 주요 원인이다. 태양 자외선 방사 (UVR)는 백내장 개발을위한 주요 위험 요소입니다. 지금까지 UVR-B 유발 백내장의 동물 모델은 개발되었습니다. UVR, 정량 RT-PCR 및 immunohistochemistry에 노출 :이 글에서 우리는 백내장 형성에 대한 조사를하는 방법을 설명합니다.
Abstract
백내장은 세계 1 실명의 주요 원인이다. 세계 보건기구 (WHO)는 빛의 전송을 막는 눈의 수정체의 뿌옇게로 백내장 정의합니다. 백내장은 당뇨병, 흡연, 자외선 방사선 (UVR), 알코올, 이온화 방사선, 스테로이드 및 고혈압과 관련된 여러 요소 질병입니다. UVR은 백내장 일으키는 강력한 2-4 실험 및 역학 증거 5,6가 있습니다. 우리는 anesthetized 7 비 anesthetized 동물 팔 모두에 UVR B 유발 백내장에 대한 동물 모델을 개발했습니다.
백내장에 대한 유일한 치료는 수술이지만이 치료는 모든 액세스 할 수 없습니다. 그것은 10 년 동안 백내장의 발병을 지연 50 % 9 백내장 수술에 대한 필요성을 줄일 수있는 것으로 추산되었습니다. 백내장의 발생을 지연하기 위해, 그것은 백내장 형성의 메커니즘을 이해하고 효과적인 예방 strat를 찾을 필요합니다egies. 백내장 개발을위한 메커니즘 중 apoptosis 인간과 동물 10 백내장의 개시에 중요한 역할을 담당하고 있습니다. 우리의 초점은 최근 백내장 개발 8,11,12을위한 메커니즘으로 렌즈의 apoptosis있다. 그것은 apoptosis 경로에 UVR의 효과를 더 잘 이해 백내장 방지 할 수있는 새로운 의약품의 발견에 대한 가능성을 제공 할 것으로 예상된다.
이 문서에서는, 우리는 실험적으로 UVR-B에 생체 노출에 의해 유도 할 수있는 방법 백내장 설명합니다. 또한 RT-PCR 및 immunohistochemistry이 도구 UVR-B 유발 백내장의 분자 메커니즘을 연구하기로 제공됩니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
본 논문은 UVR-B 유발 백내장 동안 발생하는 분자 이벤트를 공부하고 사용 방법을 설명합니다.
생체 UVR 유도 백내장에서 사용할 수 대부분의 정보는 흰둥이 Sprague-Dawley 쥐 7, 16, 17, 18, 19에서 실험에서 파생 된 것으로, 고려, 우리는 현재의 연구에 흰둥이 Sprague-Dawley 쥐를 사용하기로 결정했습니다. 쥐의 나이 여섯 일주일 정도했습니다. 남성과 대?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
S 엉터리 Drottning Viktorias Frimurarstiftelse :이 작품은 Karolinska Institutet 아이에게 자금, 스웨덴어 방사선 보호 기관, Karolinska Institutet 안구 연구 재단, 총 엉터리 Bertil Stohnes Stiftelse, 세인트 에릭의 눈 병원 연구 재단, Ögonfonden, Konung 구스타프 V에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Ketalar | Pfizer | 150086 | 50 mg/ml |
| Rompun | Bayer | 022545 | 20 mg/ml |
| Oculentum Simplex | Apoteket, Sweden | 336164 | 5 g |
| Mydriacyl | Alcon | 00352 | 10 mg/ml |
| Balanced salt solution | Alcon | 0007950055 | |
| 3.5 ul β-mercaptoethanol | |||
| NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit | Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany | 740955.50 | |
| p53 DNA specific primers | biomers.net GmbH | Custom made | |
| Taq DNA polymerase, dNTPack | Roche | 04 728 866 001 | |
| Agarose | Sigma | A5093 | |
| Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml | Sigma | E1385 | |
| Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer | NanoDrop Products | ||
| 1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) | Roche Diagnostics GmbH | 11 483 188 001 | |
| iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system | Bio-Rad Laboratories | ||
| 96-well plate | Sarstedt | 72.1979.202 | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
| TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 | Applied Biosystems | Rn00563902_m1 | |
| TaqMan Gene Expression Assay for 18s | Applied Biosystems | Hs99999901_s1 | |
| MyiQ software | Bio-Rad Laboratories | ||
| Cleaved caspase-3 (Asp175) | Cell signaling technology | 9661 | |
| Anti rabbit IgG | Abcam | Ab6798 | |
| Sucrose | Sigma Aldrich | 84097 | |
| Vectashield | Vector Laboratories | ||
| Universal Microscope Axioplan 2 Imaging | Carl Zeiss | ||
| Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 441244 | |
| TBE buffer 10x | Promega | V4251 |
References
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