एक मानव की जांच के लिए फैलोपियन ट्यूब के मॉडल<em> सी. trachomatis</em> संक्रमण
Summary
हम एक का वर्णन<em> पूर्व vivo में संक्रमण</em> मानव फैलोपियन ट्यूब कोशिकाओं के साथ बैक्टीरियल रोगज़नक़ों से प्रत्यक्ष बातचीत के दृश्य के लिए मॉडल. पूरे अंग के ऊतकों मॉडल जांच करने के लिए स्थापित किया गया था<em> सी. trachomatis</em"जीवन की तरह की शर्तों के तहत महिला फैलोपियन ट्यूब के लिए प्रेरित विकृति.
Abstract
क्लैमाइडिया trachomatis के साथ जननांग पथ के संक्रमण (सी. trachomatis) सबसे अक्सर प्रेषित दुनिया भर में महिलाओं में यौन रोग हैं. अक्षम है या रोगजनकों के निकासी हठ ऊपरी जननांगी पथ के संक्रमण आरोही और पुरानी संक्रमित ऊतकों 1,2 भड़काऊ क्षति का कारण माना करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. एक परिणाम के रूप में, श्रोणि सूजन बीमारी (पीआईडी), ट्यूबल रोड़ा और बांझपन की तरह गंभीर नैदानिक sequelae 3,4 हो सकता है.
सी. के साथ अनुसंधान के अधिकांश trachomatis उपकला कोशिका लाइनों (जैसे Hep 2 कोशिकाओं और HeLa 229) में या चूहों में आयोजित किया गया है. हालांकि, सेल संस्कृति आधारित मॉडल के साथ के रूप में, वे न तो देशी ऊतक के शरीर क्रिया विज्ञान और न ही सी. के pathophysiology प्रतिबिंबित नहीं करते trachomatis 5 vivo में जननांग पथ के संक्रमण. इसके अलावा सीमाओं तथ्य के द्वारा दिया जाता है कि केंद्रीय संकेत cascades (जैसे IFN-γ mediatएड जे ए / स्टेट संकेतन मार्ग) कि intracellular chlamydial विकास नियंत्रण में मौलिक चूहों और मनुष्य 6,7 के बीच अलग. हम और इसलिए दूसरों को एक पूरी अंग फैलोपियन ट्यूब मॉडल स्थापित करने के लिए सी. के बीच प्रत्यक्ष बातचीत की जांच trachomatis और मानव फैलोपियन ट्यूब कोशिकाओं 8,9 पूर्व vivo में.
इस प्रयोजन के लिए, मानव फैलोपियन ट्यूब गर्भाशय के दौर से गुजर महिलाओं से एकत्र किया गया और सी के साथ संक्रमित trachomatis serovar डी. 24 घंटे के बाद संक्रमण के भीतर नमूना है, जहां विश्लेषण क्लैमाइडिया trachomatis का पता लगाने के लिए स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (SEM) और संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (मंदिर) का उपयोग करने के लिए उपकला क्षति के रूप में अच्छी तरह के रूप में मध्यस्थता सी. trachomatis फैलोपियन ऊतक में शामिल गठन.
Protocol
Discussion
रोगज़नक़ प्रेरित संक्रमित ऊतकों को नुकसान के विज़ुअलाइज़ेशन कठिन है और अक्सर चूहों में प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के लिए सीमित है. हम मानव फैलोपियन ट्यूब में एक पूर्व vivo संक्रमण मॉडल स्थापित करने के लिए सी. विश्लेषण trachomatis ऊपरी महिला जननांग पथ के संक्रमण. इस पद्धति का उपयोग करके, हम सी कल्पना करने में सक्षम थे trachomatis – एक दिन के बाद संक्रमण के भीतर मानव फैलोपियन ट्यूब उपकला प्रेरित नुकसान. सेलुलर सूजन और lysis ठेठ morphological परिवर्तन है कि सी में मनाया गया. trachomatis संक्रमित फैलोपियन ट्यूब लेकिन गैर संक्रमित नियंत्रण में नहीं है. मंदिर विश्लेषण से पता चला कि Chlamydiae संक्रमित ऊतकों के भीतर एक विशिष्ट intracellular विकास चक्र को लागू करने के लिए, फिर से विभेदित प्राथमिक लेकिन यह भी शरीर बढ़े हुए जाल से ढँकना शरीर है कि दृढ़ता से संकेत मिलता है हो सकता है के साथ छोटे inclusions के साथ बड़े inclusions के दिखा. हालांकि, रूपात्मक अकेले तस्वीर repl के बीच भेदभाव करने के लिए पर्याप्त नहीं हैicating और लगातार संक्रमण, जो कम चयापचय की विशेषता है और 10 antimicrobials के प्रतिरोध की वृद्धि हुई.
संक्रमित फैलोपियन ट्यूब में उपकला के विनाश या तो सी. के विघटन के कारण है trachomatis – intracellular विकास चक्र और संक्रामक प्राथमिक निकायों या समर्थक भड़काऊ 8 साइटोकिन्स की रिहाई की रिहाई के पूरा होने के बाद संक्रमित उपकला कोशिकाओं. रोगज़नक़ प्रेरित ऊतकों को नुकसान और सी. के खिलाफ मेजबान प्रेरित प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं trachomatis उपकला कोशिका समारोह, तंतुप्रसू, remodeling और 8,11 vivo में अंततः ट्यूबल बांझपन के नुकसान के लिए अग्रणी के लिए प्रमुख कारकों को माना जाता है.
इस मॉडल के प्रमुख सीमाओं के भड़काऊ कोशिकाओं के अभाव है जो प्रारंभिक सी. करने के लिए माध्यमिक प्रभाव के विश्लेषण बाधित है फैलोपियन ट्यूब उपकला trachomatis संक्रमण. हालांकि, मॉडल एपी हैविभिन्न पर्यावरणीय स्थितियों (जैसे ऑक्सीजन सामग्री) और तीव्र सी. में प्रारंभिक मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की जांच propriate trachomatis संक्रमण 8,9. आगे की योजना सी. के खिलाफ antimicrobials की परीक्षण के लिए एक मॉडल स्थापित कर रहे हैं पूरे मानव फैलोपियन ट्यूब में और विभिन्न विकासात्मक 2 फोटॉन लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोपी द्वारा ट्यूबल उपकला में मनाया चरणों के चयापचय राज्यों विशेषताएँ trachomatis.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम "सूजन इंटरफेस पर" उत्कृष्टता के DFG-क्लस्टर (आरए यदि, आरए डी) द्वारा समर्थित किया गया. हम क्रिस्टिन Wischnat के उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए आभारी हैं.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| DMEM | PAA | E15-843 | |
| RPMI | PAA | R15-802 | |
| FCS | PAA | A15-101 | |
| Cycloheximide | Sigma – Aldrich | ||
| SPG Buffer | various | see recipe below | |
| Monti’s fixative | various | see recipe below | |
| sodium cacodylate buffer | various | see recipe below | |
| Richardson’s stain | various | see recipe below |
Recipes:
1. SPG Buffer
- Add 75 g sucrose.
- Add 2.47 g disodium phosphate.
- Add 0.36 g monosodium phosphate.
- Add 0.72 g glutamic acid.
- Fill to 1 l with aqua dest.
- Adjust pH to 7.3.
2. 0.1 M sodium cacodylate buffer, pH 7.35.
- Add 42.80 g dimethylarsenic acid sodium salt.
- Add 68.46 g sucrose.
- Fill to 1 l with aqua dest. to get 0.2 M sodium cacodylate buffer.
- Before use dilute solution with aqua dest. to desired concentration and adjust pH to 7.35 if necessary.
3. Monti’s fixative
- Add 156 ml 0.12 M sodium cacodylate buffer. 3.2 Add 25 ml 25% glutardialdehyde in aqua dest.
- Add 19 ml 10% paraformaldehyde in aqua dest.
- Add 3 ml 3% CaCl2 in aqua dest.
- Adjust pH to 7.35 and fill with aqua dest. to 312 ml final solution.
4. Richardson’s stain
- Mix equal parts of 1% methylene blue in 1% aqueous borax solution and 1% Azur II in aqua dest.
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