して、古いニワトリ胚への遺伝子導入<em> EX OVO</em>エレクトロポレーション
Summary
後のインキュベーション段階（ハンバーガーとハミルトンステージ（HH）22歳以上）でニワトリ胚への遺伝子導入方法が記載されています。このメソッドは次の欠点を克服する<emOVOで></em>エレクトロポレーションは、古いニワトリ胚に適用され、古い発達の段階で遺伝子の機能と調節を研究するための便利なテクニックです。
Abstract
ニワトリ胚は、胚発生時の遺伝子の機能と調節を研究するための優れたモデルシステムを提供します。OVOエレクトロポレーションで過剰発現する外来遺伝子に強力なメソッドまたはニワトリ胚1のin vivoでダウンレギュレートする内因性遺伝子である。このようなDNAプラスミドをコードする遺伝子2-4、低分子干渉RNA（siRNA）のプラスミド5、小さな合成RNAオリゴ6、モルホリノ、アンチセンスオリゴヌクレオチド7と異なる構造を簡単にエレクトロポレーションによってニワトリ胚にトランスフェクトすることができます。しかし、OVOエレクトロポレーションでのアプリケーションは、初期のインキュベーション段階（ステージHH20未満-ハンブルクとハミルトンによる）で胚に限定されている8およびそれ以降の段階で胚への応用のためのいくつかの欠点は、（ステージHH22歳以上あります-約3.5開発の日）。たとえば、後の段階では卵黄膜は有珠山である味方SHALL膜に付着し、シェルウィンドウを開くには、胚の死、その結果、血管の破裂を引き起こす。古い胚は、それが胚にアクセスして操作することは困難である卵黄と尿膜の血管によって覆われている、古い胚が移動精力的に、シェルでは比較的小さな窓から配向性を制御することは困難である。
このプロトコルでは、後期段階（ステージHH22歳以上）でニワトリ胚への遺伝子導入のために元のOVOエレクトロポレーション法を示しています。 元OVOエレクトロポレーションのために、胚はペトリ皿9に培養されており、卵黄や尿管が広く普及しています。これらの条件下では、古いニワトリ胚は、簡単にアクセスおよび操作されます。したがって、このメソッドは、以前のニワトリ胚に適用されるOVOエレクトロポレーションでの欠点を克服しています。この方法を使用して、プラスミドを容易に異なる部分にトランスフェクトすることができます古いニワトリ胚10-12。
Protocol
Discussion
このプロトコルは、 元のOVOエレクトロポレーションによって、古いニワトリ胚への遺伝子導入（例えば、E6で視蓋に）のためのガイドを提供します。このメソッドは古い鶏胚にエレクトロポレーションの使用を拡張し、簡単に後の段階でin vivoでの遺伝子機能を研究するための多くの研究室に適用することができます。 E4から少なくともE7の胚は正常にこのメソッドによってエレ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、ドイツ研究財団（; LU1455/1-1 DFG）からの助成金によってサポートされていました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number |
| Electroporator | Nepa Gene, Japan | CUY21-Edit |
| Electrodes | Nepa Gene, Japan | CUY661-3×7 |
| Egg incubator | Ehret, Germany | BSS160 |
| Embryo incubator | BINDER GmbH, Germany | |
| Fluorescent microscope | Keyence, Deutschland GmbH | BZ-8000 |
| Petri dish | Greiner Bio-One GmbH, Germany | |
| Microelectrode puller | World Precision Instruments, Germany | PUL-100 |
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