성인 쥐의 특정 두뇌 영역의 Excitotoxic 병변에 대한 Stereotaxic 외과
Summary
stereotaxic 좌표를 사용하여 excitotoxin의 주입에 의한 특정 뇌 영역의 타겟으로 절제 (들)은 설명되어 있습니다. 이 기술은 또한 쥐의 두뇌로 다른 화학 물질의 주입을 위해 적응 수 있습니다.
Abstract
설치류 동물과 인간을 포함한 포유류에서 많은 행동 기능이 이산 뇌 영역에 의해 주로 매개된다. 행동이나 다른 실험 결과에 대한 다양한 뇌 영역의 안목 기능을위한 일반적인 방법은 함수의 지역화된 절제를 구현하는 것입니다. 인간에서 지역화된 뇌 병변과 환자 집단은 종종 손상된 영역의 기본적인 기능을 드러내는 희망으로 결손을 위해 공부하고 있습니다. 설치류에서, 하나는 실험적으로 특정 뇌 영역의 병변을 일으킬 수.
장애는 여러 가지 방법으로 수행할 수 있습니다. 전해 병변은화된 손상을 일으킬 수 있지만 세포 유형의 다양성뿐만 아니라 병변 사이트 가까이 될 일이 다른 뇌 영역에서 선법 섬유를 손상시킬 것이다. 셀 타입의 특정 발기인을 사용하여 유전자 기술은 또한 특정 사이트 타겟팅을 설정할 수 있습니다 Inducible. 이 기술은 대상 뇌의 영역에 따라 복잡하고 항상 실용적 아닙니다. Excitotstereotaxic 수술을 사용 oxic 병변은 대조적으로, 지역 glial 세포를 손상하거나 섬유 선법없이 흥분성의 뉴런을 lesioning 가장 신뢰할 수 있고 실용적인 방법 중 하나입니다.
여기서는 excitotoxin, basolateral 편도의 복합에 N-메틸-D-aspartate (NMDA)의 stereotaxic 주입을위한 프로토콜을 제시한다. 해부 학적 징후를 사용하여, 우리는 타겟 뇌 영역의 위치를 확인하고 바로 목표 위 장소에 주사 바늘을 내리고 stereotaxic 좌표를 적용합니다. 그러면 인근 뉴런의 excitotoxic 죽음 그 결과 두뇌에 우리 excitotoxin을 불어 넣다. 선택이 우리의 실험 대상이 생쥐는 있지만, 같은 방법은 장비와 좌표에서 적절한 조정으로 다른 포유 동물에 적용할 수 있습니다.
이 방법은 basolateral 편도 1-6, 다른 편도의 핵 6, 7, 해마 8, 엔트 포함한 뇌 영역의 다양한 사용될 수 있습니다orhinal 피질 9 전두엽 피질 10. 그것은 또한 바이러스성 벡터 1, 11와 같은 생물 학적 화합물을 불어 넣다하는 데 사용할 수 있습니다. 기본 stereotaxic 기술은 또한 흥미 화합물에 더 오래 노출되어서 있도록 더 영구적인 삼투 펌프의 주입을 위해 적응 수 있습니다.
Protocol
Discussion
여기서 제시 stereotaxic 방법은 NMDA의 주입을 통해 특정 뇌 영역의 excitotoxic 병변을 허용합니다. 기본 stereotaxic 방법은 사이트에 특정한 방식으로 pharmacological 및 생물 학적 에이전트 다양한 달이다하기 위해 적용할 수 있습니다. 또한 뇌 아틀라스 12 그들 stereotaxic 좌표에 의해 정의된 뇌 영역의 다양을 대상으로 적용할 수 있습니다. 같은 생쥐 등 다른 수종에 대한 적응은 작은 동물을 위해 만…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 나중에이 predoctoral 교제 (EDK), NARSAD 젊은 탐정 수상 (디케이)와 NIMH의 두뇌 보너스 (R01MH087495) (디케이)가 CIRM 지원되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| N-Methyl-D-aspartic Acid 98% | Fisher Scientific | AC32919-0500 | |
| Dual Lab Standard Stereotaxic w/45 deg. Ear Bars | Stoelting | 51653 | Alternative vendor: Kopf *note of caution: assure compatibility of stereotaxic accessories if purchasing from multiple vendors |
| 10μl SYR SPECIAL (*/*/*) | Hamilton | 701SN | |
| Dremel Moto-Tool | Stoelting | 58600 | Alternative vendor: Kopf |
| Carbide burs, handpiece HP, size 2 | Schein Dental | 2284578 | |
| Stoelting 6 Syringe Programmable Pump | Stoelting | 53140 | Alternative vendor: Kopf |
| Stainless Steel 316 Hypodermic Regular Wall Tubing 30 Gauge .0123″ OD x .00625″ ID x .003″ Wall (infusion needle) | Small Parts | HTXX-30R-06-05 | |
| Intramedic PE 20 tubing (infusion tubing) | VWR | 63019-025 | |
| Reflex Clips, 9mm, non-sterile | Kent Scientific Corp. | INS500346 | Alternative vendor: Fine Science Tools |
| Reflex Clip Applier for 9mm clips | Kent Scientific Corp. | 12031-09 | Alternative vendor: Fine Science Tools |
| Curved Hartman hemostat | Fine Science Tools | 13003-10 | |
| London forceps | Fine Sceince Tools | 11080-02 | |
| 2% chlorhexidine solution | Allivet | 30159 | Alternative vendor: PetSolutions |
| 10% povidone iodine solution | CVS | SKU #739575 | |
| Hot bead sterilizer | Harvard Apparatus | 610183 |
Table 1. Table of specific reagents and equipment.
References
- Kirby, E. D. Basolateral amygdala regulation of adult hippocampal neurogenesis and fear-related activation of newborn neurons. Mol. Psychiatry. , (2011).
- Goosens, K. A., Maren, S. Contextual and auditory fear conditioning are mediated by the lateral, basal, and central amygdaloid nuclei in rats. Learn Mem. 8, 148-155 (2001).
- Korz, V., Frey, J. U. Bidirectional modulation of hippocampal long-term potentiation under stress and no-stress conditions in basolateral amygdala-lesioned and intact rats. J. Neurosci. 25, 7393-7400 (2005).
- Bhatnagar, S., Vining, C., Denski, K. Regulation of chronic stress-induced changes in hypothalamic-pituitary-adrenal activity by basolateral amygdala. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1032, 315-319 (2004).
- Ikegaya, Y., Saito, H., Abe, K. Attenuated hippocampal long-term potentiation in basolateral amygdala-lesioned rats. Brain Res. 656, 157-164 (1994).
- Ikegaya, Y., Saito, H., Abe, K. The basomedial and basolateral amygdaloid nuclei contribute to the induction of long-term potentiation in the dentate gyrus in vivo. Eur. J. Neurosci. 8, 1833-1839 (1996).
- Carter, R. N., Pinnock, S. B., Herbert, J. Does the amygdala modulate adaptation to repeated stress. Neurosciene. 126, 9-19 (2004).
- Roozendaal, B., McGaugh, J. L. Basolateral amygdala lesions block the memory-enhancing effects of glucocorticoid administration in the dorsal hippocampus of rats. Eur. J. Neurosci. 9, 76-83 (1997).
- Roesler, R., Roozendaal, B., McGaugh, J. L. Basolateral amgdala lesions block the memory-enhancing effect of 8-Br-cAMP infused into the entorhinal cortex of rats after training. Eur. J. Neurosci. 15, 905-910 (2002).
- Roozendaal, B. Glucocorticoid effects on memory consolidation depend on functional interactions between the medial prefrontal cortex and basolateral amygdala. J. Neurosci. 29, 14299-14308 (2009).
- Kaufer, D. Restructuring the neuronal stress response with anti-glucocorticoid gene delivery. Nat. Neurosci. 7, 947-953 (2004).
- Paxinos, G., Watson, C. . The rat brain: in stereotaxic coordinates-the new coronal set. , (2004).
- Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents. J. Vis. Exp. (20), e880 (2008).
