En lav dødelighed Rat model til at vurdere Forsinket cerebral vasospasme efter eksperimentel subarachnoid blødning

Summary

Aneurismal subarachnoid blødning (SAH) blødning, der forekommer i det subarachnoide rum, når en aneurisme brister. Mens sygelighed og dødelighed af denne begivenhed har været på en tilbagegang på grund af forbedrede behandlingsmetoder, at risikoen for vasospasme efter subarachnoid blødning fortsætter med at være det samme som det var flere år siden. Vigtigheden af ​​at etablere en omfattende og reproducerbar dyremodel til at identificere initierende begivenheder af cerebral vasospasme har været genstand for forskning siden den første brug af rotter i en eksperimentel vasospasme model i 1979 af Barry<em> Et al.</em> Tidlig arbejde i rotter viste, at en enkelt injektion af autologt blod ind i Cisterna magna førte til akut (inden for minutter), men ikke forsinket cerebral vasospasme^{3, 6, 14}. Her vi karakterisere en lav dødelighed SAH rottemodel, der resulterer i reproducerbar forsinket vasospasmer.

Abstract

Formål: At karakterisere og etablere en reproducerbar model, der demonstrerer forsinket cerebral vasospasme efter aneurysmal subarachnoid blødning (SAH) hos rotter med henblik på at identificere de initierende hændelser, patofysiologiske forandringer og potentielle mål for behandling.

Metoder: Otteogtyve Sprague-Dawley-rotter (250-300 g) blev arbitrært tildelt en af ​​to grupper – SAH eller saltvandskontrol. Rotte subarachnoid blødning i SAH-gruppen (n = 15) blev induceret ved dobbelt injektion af autologt blod, 48 timer fra hinanden, ind i cisterna magna. Tilsvarende normalt saltvand (n = 13) blev injiceret i cisterna magna af saltvand kontrolgruppe. Rotter blev aflivet på dag fem efter den anden blod injektion og hjernerne blev bevaret til histologisk analyse. Graden af ​​vasospasme blev målt ved anvendelse dele af basilararterien, ved at måle den indre luminale tværsnitsareal med NIH Image-J software. Betydningen blevtestet ved hjælp af Tukey / Kramer 's statistiske analyser.

Resultater: Efter analyse af histologiske snit blev basilararterien luminal tværsnitsareal mindre i SAH end i saline group, i overensstemmelse med cerebral vasospasme i den førstnævnte gruppe. I SAH gruppen var basilararterien indre område (0,056 gm ± 3) betydeligt mindre fra vasospasmer fem dage efter den anden blod injektion (syv dage efter den initiale blod injektion), sammenlignet med saltvand kontrolgruppe med indre område (0,069 ± 3, p = 0,004). Der var ingen dødsfald fra cerebral vasospasme.

Konklusion: rotte double SAH model fremkalder en mild, levedygtige, basilararterien vasospasme, der kan anvendes til undersøgelse af de patofysiologiske mekanismer i cerebral vasospasme i en lille dyremodel. En lav og acceptabel dødelighed er et vigtigt kriterium at være opfyldt for en ideel SAH dyremodel, så de mekanismer vasospasmer kan være elucidated ^{7, 8.} Yderligere ændringer af modellen kan gøres for at justere for øget sværhedsgrad af vasospasme og neurologiske eksamener.

Protocol

1. Rotte Surgery for SAH Emne injiceret med 0,15 ml Autolog arterieblod Rotten bedøves med 0,1 mg / kg af ketamin / xylazin gnaver cocktail og fik lov at sidde i 5 minutter. Passende bedøvelse bekræftes af reduktion i bagbenet refleks. Ved hjælp af en elektronisk shaver en hals at snuse område af hår rundt om sub-occipital regionen er barberet. Dyret anbringes i rygleje på operationsdagen bordet og halen er penslet med betadin at sikre en steril indsnit. En lige …

Representative Results

Inden protokollerne der er beskrevet ovenfor, er der adskillige trin, som vi mener kræve en bedre karakterisering af modellen end det tidligere er blevet beskrevet i litteraturen. Her fokuserer vi på de skridt, som er nødvendige for at opnå en reproducerbar lav dødelighed cerebral vasospasme lille dyremodel og undgå potentielle faldgruber forbundet med denne model, hvis det ikke gøres korrekt. 1. Autologt blod Draw fra halearterien: Omhyggelig placering af an…

Discussion

Primater, der har en mere ens genetiske sammensætning og anatomiske træk til det menneskelige, mere nøje efterligner begivenhederne i forsinket cerebral vasospasme og kan lettere gennemgå ikke-invasiv billeddannelse (MRI og angiografi) at overvåge arterielle ændringer, end gnavere ^8. Men primatmodeller er omkostningseffektive uoverkommelige og forbundet med mere komplekse pleje og etiske spørgsmål, end små dyremodeller. Små dyr, SAH-modeller, der er udviklet tidligere har fokuseret på tre metoder t…

Materials

Name of equipment / reagent	Company	Catalogue Number
Male SD rats (250-300 g)	Taconic	SD-M
26 G Catheters	Webster	8416683
25 G Needles	Buffalo	305122
1 cc Syringes	Central stores	54245
Ketamine/Xylazine cocktail	Animal Care (SUNY)*	–
Betadine	Central stores	51458
Sucrose	Sigma	S9378-1kg
Paraformaldehyde	Sigma	P6148-500G
Phosphate buffer solution	Fisher	BP-399-4
Surgical Table	Harvard	PY2 72-2590
OCT Compound (cryoprotection)	VWR	25608-930
Superfrost Slides	Fisher	12-550-15

* Synthesized at Department of Laboratory Animal Care, SUNY Upstate Medical University. Add 1 cc [100 mg/ml] of Xylazine to 10 ml [100 mg/ml] of Ketamine.