骨髄移植によるマウス大腸炎における免疫および非免疫細胞からの遺伝子発現の機能的役割を差別化
Summary
骨髄移植は、骨髄由来細胞の遺伝子型を変更する方法を提供します。目的の遺伝子が骨髄由来細胞と非骨髄由来細胞の両方で発現されている場合は、骨髄移植では、非骨髄由来細胞の遺伝子型を変更することなく、異なる遺伝子型に骨髄由来細胞を変更することができます。
Abstract
大腸炎の開発における遺伝子の役割を理解するために、我々は、野生型マウスと大腸炎に目的遺伝子欠損ノックアウトマウスの応答を比較した。目的遺伝子は、骨髄由来の細胞とホストの非骨髄由来細胞の両方で発現される場合、ただし、それは、骨髄由来の細胞と非骨髄に目的の遺伝子の役割を区別することが可能である骨髄移植技術によって誘導された細胞。マウスの骨髄由来細胞の遺伝子型を変更するには、レシピエントマウスのオリジナルの骨髄を照射して破壊され、その後、別の遺伝子型の新しいドナー骨髄に取って代わられた。野生型マウスのドナー骨髄をノックアウトマウスに移植したとき、我々は骨髄由来の細胞における野生型遺伝子の発現とノックアウトマウスを生成することができます。あるいは、時のノックアウトマウスドナー骨髄は目的遺伝子を発現せず、野生型レシピエントマウスは、野生型マウスに移植した骨髄由来の細胞を作製した。しかし、骨髄移植は100％完全ではありません。そこで、レシピエントマウスと骨髄移植の成功におけるドナー骨髄由来の細胞の割合を追跡するために、ドナーとレシピエント細胞のマーカーとして分化（CD）の分子のクラスタ（CD45.1とCD45.2）を利用。 CD45.2遺伝子型を持つCD45.1遺伝子型とノックアウトマウスと野生型マウスを用いた。レシピエントマウスの照射後、異なる遺伝子型のドナー骨髄細胞をレシピエントマウスに注入した。新しい骨髄がその免疫を引き継ぐために再生したときに、マウスは大腸炎を誘導する化学剤（デキストラン硫酸ナトリウム、DSSの5％）でチャレンジした。ここで我々はまた、マウスでは大腸炎を誘導し、骨髄由来の細胞から発現対象の遺伝子の役割を評価するための手法を示した。骨由来の細胞から目的遺伝子は、疾患の発症に重要な役割を（例えば大腸菌などに再生される場合TIS）、骨髄移植によるレシピエントマウスの表現型を大幅に変更することができます。大腸炎の実験の最後に、血液や骨髄中の細胞を骨髄由来がCD45.1とCD45.2に対する抗体と存在の彼らの量的比率を用いて標識したフローサイトメトリーにより、骨髄移植の成功を評価するために使用することができる。成功した骨髄移植はレシピエントマウスの骨髄や血液の両方で受信者の遺伝子型以上のドナー遺伝子型（CD分子マーカーの任期で）の大半を示すべきである。
Protocol
Representative Results
Discussion
この骨髄移植のアプローチは、大腸炎の免疫学研究、感染症、癌、肥満や他の病気のために適している。この骨髄移植実験は、目的遺伝子が両方の骨髄由来と非骨髄由来細胞と目的遺伝子がいずれの集団からの細胞によって病気を媒介することが疑われるで発現した場合に必要とされる。例えば、抗菌ペプチドカテリシジンは、急性大腸炎を調節することが示されている。しかし、それは、?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、カリフォルニア大学ロサンゼルス校（UCLA）-CUREセンター、クローン病とアメリカのキャリア開発賞（＃2691）と健康NIDDK K01研究所（DK084256）本町ワイクーンへの資金の大腸炎財団からパイロットとフィージビリティスタディの助成金によって賄われていた。
骨髄照射操作がバーナード·レヴィンとエイズ研究ヒト/マウスキメラ中核施設のためのUCLAのセンターのスコット·キッチンの援助を受けた。フローサイトメトリー操作はUCLAのベクトル·コア施設によって支援された。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Cell staining buffer | Biolegend | #420201 |
| 10X RBC lysis buffer | Biolegend | #420301 |
| FITC mouse isotype control | Biolegend | #400207 |
| PE mouse isotype control | Biolegend | #400211 |
| PE anti-mouse CD45.2 | Biolegend | #109807 |
| FITC anti-mouse CD45.1 | Biolegend | #110705 |
| Anti-mouse CD16/32 blocking | Biolegend | #101301 |
| 40 μm cell strainer | Fisherbrand | #22363547 |
| PBS 1X | MP biomedicals | #1860454 |
| Heparin | Fisherbrand | #BP2425 |
| Sulfatrim (SMZ) | Qualitest | NC9242720 (fisher) |
| Lysol IC | Andwin Scientific | NC9745686 (fisher) |
| Vaccutainer | BD | #8000813 |
| Mouse restrainer | Braintree Scientific | #TV-150 |
| Irradiator | J.L. Shepherd and Associates | Mark I 68A |
| Flow cytometer | BD | BD FACSCanto II |
| Flow cytometer test tube | Falcon | #352052 |
| Digital caliper | Fisherbrand | 14-648-17 |
| Hemoccult ICT | Beckman Coulter | G0328QW |
References
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