隔離された心筋細胞の細胞機能に対する抗体の効果測定
Summary
提示された方法は、細胞の短縮と分離したラットの心筋細胞の細胞内カルシウムトランジェントの隔離患者の免疫の影響を分析することで、にかかわらず、特定の抗原の、拡張型心筋症患者の血漿中で機能的な効果cardiotropic自己抗体を検出する方法を提供します。
Abstract
拡張型心筋症（DCM）は、若年成人1で心不全のための主要な原因の一つです。有毒物質に対する遺伝的気質と博覧会は、患者の約3分の1で、この病気の原因を知られているが、DCMの起源は、主に不明なままである。これらの患者の相当数は、心臓エピトープに対する自己抗体が検出されており、2,3病の発症と進行に重要な役割を果たすことが疑われている。心筋自己抗体の重要性は、免疫吸着3月5日で自己抗体を除去した後、DCM患者において観察された血行動態の改善によって強調される。特定の種々の抗原は、すでに2,3同定されており、これらのターゲットに対する抗体は免疫アッセイによって検出することができる。しかし、これらのアッセイは、刺激（したがって、機能的に有効な）と自己抗体をブロッキングを区別することはできません。 evidenが高まっているこの区別は6,7重要であることをCE。またcardiotropic抗体の数のターゲットはまだ正体不明であるため、免疫アッセイでは検出できないことが想定される。したがって、我々はそれぞれの抗原とは独立し、機能的に活性なcardiotropic抗体の検出のための方法を確立した。法の背景には、通常哺乳類8,9間に心臓のタンパク質の機能領域について観測と高い相同性があります。これは、ヒト抗原に対する抗体が心臓になる成体ラットの心筋細胞のDCM患者からのIgGのテストを許可する非ヒト標的細胞と交差反応することを示唆している。本手法は3つのステップで構成されています：最初に、IgGは免疫吸着カラム（PlasmaSelect、テーテロー、ドイツ）から入手セファロース結合抗IgG抗体を用いて患者血漿から分離されています。第二に、成体心筋細胞は、APを使用してランゲンドルフ灌流装置にコラゲナーゼ灌流によって分離されているrotocolは、以前の作品から、10,11を変更しました 。得られた心筋細胞は容易に細胞内カルシウム（Ca 2 +）の内容12を観察するための細胞内に持ち込むことのできるカルシウム選択的蛍光色素、ラミニンコートチャンバーcoverglassesに取り付け、のFura-2で染色されています。最後のステップでは、細胞短縮とCa 2上の患者IgGの効果フィールドの+過渡刺激心筋細胞は、商業筋細胞のカルシウムと標準蛍光逆に接続されている収縮性監視システム（IonOptix、ミルトン、MA、USA）を使用してオンラインで監視されている顕微鏡。
Protocol
Representative Results
Discussion
提示された方法は不明起源のDCM患者において、機能的に有効な心臓の自己抗体を検出するのに適した方法を提供しています。他の方法と比較して、cAMPレベル6への影響により、β1-アドレナリン受容体に対して機能アクティブ抗体の検出を、例えば 、我々の手法は、特定のエピトープとは無関係です。もちろん、文献に記載されている他のエピトープの独立したアッセイは、パ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
心血管疾患における体液性免疫応答（ – この作品は、ドイツ学術振興協会（DFG）のSonderforschungsbereich Transregio 19（SFB/TR19、C2）は、経済技術プロジェクトZIM-KF 2727801MD0連邦省とイノベーションのコンピテンスセンターでサポートされていたZIK-ハイキング、教育研究、ドイツ連邦省BMBF FKZ 03Z2CN12）。動物とハウジングとの実験は、実験動物学（ゲゼルシャフトエリーゼのためVersuchstierkunde、GV-SOLAS条約）と欧州実験動物学協会（FELASA）連合学会の勧告に従って行われた。
Materials
| Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| Immunosorba preservation solution | Fresenius Medical Care | 903609211 | |
| Collagenase type 2 | Cell System | LS004176 | |
| BSA, fatty acid free | Sigma-Aldrich | A6003 | |
| Laminin | Sigma-Aldrich | L2020 | |
| Fura-2 AM | Sigma-Aldrich | F0888 | 1 mg/ml in DMSO |
| Econo Pac Chromatography Columns | BioRad | 732-1010 | |
| Spectra/Por Biotech Cellulose Ester Dialysis Membrane | Spectrumlabs | 131417 | |
| 4 well Chambered Coverglass | Nunc | 155383 | |
| Myocyte Calcium and Contractility Recording System | IonOptix | ||
| IonWizard 6.0 analysis software | IonOptix |
References
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