Summary

Kératite herpétique récurrente stromale chez la souris, un modèle pour l'étude de l'homme HSK

Published: December 18, 2012
doi:

Summary

La plupart des études de la maladie de la cornée herpétique utiliser un modèle d'infection primaire. Cependant, la primo-infection par le HSV-1 habituellement, n'aboutit pas à la maladie humaine. Nous décrivons ici un modèle récurrent de la maladie herpétique cornée, ce qui rapproche le plus de la maladie humaine.

Abstract

Maladie oculaire herpétique, appelée kératite herpétique stromal (HSK), est une infection potentiellement cécitante de la cornée qui se traduit par plus de 300.000 visites cliniques chaque année pour le traitement. Entre 1 et 2 pour cent de ces patients atteints de la maladie clinique constatez une perte de la vision de la cornée infectée. La grande majorité de ces cas sont le résultat d'une réactivation d'une infection latente par l'herpès simplex virus de type I et non en raison d'une maladie aiguë. Fait intéressant, l'infection aiguë est le modèle le plus souvent utilisé pour étudier cette maladie. Toutefois, il a été estimé que le modèle récurrent de HSK serait plus représentatif de ce qui se passe au cours de la maladie clinique. Les modèles animaux récurrents pour HSK ont employé deux lapins et des souris. L'avantage des lapins est qu'ils éprouvent la réactivation de la latence absence de tout stimulus connu. Cela dit, il est difficile d'étudier le rôle que de nombreux facteurs immunologiques jouer dans HSK récurrente parce que le modèle de lapin n'a pas l'immunitéressources méthodologiques et génétique de la souris a. Nous avons choisi d'utiliser le modèle de souris pour HSK récurrente car elle a l'avantage de l'existence de nombreuses ressources disponibles et aussi savoir quand aura lieu la réactivation parce réactivation est induite par l'exposition aux rayons UV-B. Jusqu'à présent, ce modèle a permis à ces laboratoires de l'utiliser pour définir plusieurs facteurs immunologiques qui sont importantes pour cette maladie. Il nous a également permis de tester à la fois thérapeutique et l'efficacité du vaccin.

Protocol

Remarque protection des animaux: Les analgésiques sont pas utilisées dans ce modèle car ils sont anti-inflammatoires et donc invalider le modèle. 1. Préparation de virus Cultiver HSV-1 sur des cellules Vero (80% de confluence) en utilisant une dilution à partir de 0,01 multiplicité d'infection (en fiole T-150, d'environ 5 x 10 5 unités formant plaque) pendant 3-4 jours jusqu'à ce que toutes les cellules ont une rafle et sont facilement délogés en fra…

Discussion

Le modèle récurrent de kératite stromale herpétique (HSK) décrit ici permet à l'enquêteur d'étudier HSK humain dans un modèle qui est plus conforme à ce qui est observé au cours de la maladie humaine. Ainsi, les forces du modèle sont que la maladie se produit dans le cadre d'un système immunitaire qui a déjà stimulé par la maladie pendant primaire. Étant donné que ces souris ont déjà une réponse immunitaire contre le HSV-1, les facteurs qui réactivent que la réponse immunitaire sont pr…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Les auteurs tiennent à remercier le Dr Jay Pepose pour aider l'enseignement du modèle pour nous. Ce travail a été soutenu par des subventions des National Institutes of Health EY11885 (PMS), EY21247 (PMS) et une subvention sans restriction de Research to Prevent Blindness au Département d'ophtalmologie.

Materials

DMEM Sigma D5796
Fetal Bovine Serum Atlanta Biologicals S11150
Human Serum Sigma S7023
L-Glutamine Cellgro 25-005-C1
Pen/ Strep Sigma P4333
Fungizone Invitrogen 15290018
Centrifuge Sorvall Legend RT
Centrifuge Beckman 52-21
Transilluminatior UVP 95-0452-02
Sonicatior Branson Sonifier 450
Oak Ridge Tubes Nalgene Z 720410
Flasks- 7150 Corning 430823
Plates- 12 well Corning CLS 3513
Plates- 48 well Corning CLS 3548
Sterile Conical Tubes- 30 ml Corning CLS 430828
Sterile Cotton-tipped Applicators Fisher 23-400-125
30G Needles Becton-Dickinson 305106
25G Needles BD 305122
10 ml Syringe BD 309602
10 ml Syringe BD 309604

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Citer Cet Article
Morris, J., Stuart, P. M., Rogge, M., Potter, C., Gupta, N., Yin, X. Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK. J. Vis. Exp. (70), e4276, doi:10.3791/4276 (2012).

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