Bioluminescent Бактериальные изображений<em> В Vivo</em
Summary
В этой статье описывается управление<em> Люкс-отмеченных</em> Бактериями мышей и последующее<em> В естественных условиях</em> Анализ с использованием ИВИС биолюминесценции изображений.
Abstract
Это видео описывает использование всего тела bioluminesce томография (BLI) для изучения бактериальных торговле живыми мышами, с акцентом на использовании бактерий в генной и клеточной терапии рака. Бактерии, присутствующие привлекательной класс вектор для лечения рака, обладающие природной способностью расти преимущественно в опухоли после системного введения. Бактерии инженерии, чтобы выразить кассеты люкс гена разрешения BLI обнаружения бактерий и одновременно опухоли сайтов. Расположение и уровень бактерий в опухоли с течением времени могут быть легко рассмотрены, визуализировали в двух или трех измерениях. Метод применим для широкого спектра бактериальных видов и типов опухолей ксенотрансплантата. В данной статье описывается протокол для анализа биолюминесцентного бактерий в подкожной опухоли мышей подшипника. Визуализация синантропных бактерий в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) от BLI также описан. Это мощный и дешевый, изображений в реальном времени стратегия предTS идеальный метод для изучения бактерий в естественных условиях в контексте исследования рака, в частности генной терапии и инфекционных заболеваний. Это видео описывает процедуру для изучения люкс с метками E. палочки в живых мышей, что свидетельствует о пространственной и временной отсчет достижимо использованием BLI с системой ИВИС.
Protocol
Discussion
В контексте генной терапии, использование биологических агентов для доставки терапевтических генов для пациентов показало большие надежды 3-5. Подобно вирусам, врожденные биологические свойства бактерий условия для эффективной доставки ДНК в клетки или ткани, особенно в контек?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы отметить поддержку, относящиеся к этой рукописи от Европейской комиссии Седьмой Рамочной Программы (PIOF-GA-2009-255466) и Ирландский совет по исследованиям в области здравоохранения (HRA_POR/2010/138). Lux-отмеченных E. палочка была своего рода подарок от доктора Кормак Гаан, University College Cork.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| 4T1 cell line | ATCC | CRL-2539 | Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor |
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium |
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Phosphate Buffered Saline |
| Xenogen IVIS | Caliper Life Sciences | IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D. | |
| Luria Broth Miller (LB) | Sigma-Aldrich | L2542 | Growth medium for E. coli |
| Erythromycin | Sigma-Aldrich | E5389 | Antibiotic |
| Streptomycin | Sigma-Aldrich | S9137 | Antibiotic |
| MF1nu/nu mice | Harlan (UK) | 069(nu)/070(nu/+) | Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu |
| Balb/c mice | Harlan (UK) | 066 | Haplotype: H-2d |
| Gavage needle | Vet-tech Solutions (UK) | DE009 | 22G x 38mm straight gavage needle |
| Syringe for IV injection | BD BioSciences | 309309 – 1 ml | Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle. |
| Syringe for tumor inoculation | Braun | 9161376V | Omnifix 26 G x ½ inch needle |
References
- Cronin, M., et al. High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting. PLoS One. 7, e30940 (2012).
- Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. Three-dimensional reconstruction of in vivo bioluminescent sources based on multispectral imaging. J. Biomed. Opt. 12, 024007 (2007).
- Tangney, M., Ahmad, S., Collins, S. A., O’Sullivan, G. C. Gene therapy for prostate cancer. Postgrad Med. 122, 166-180 (2010).
- Morrissey, D., O’Sullivan, G. C., Tangney, M. Tumour targeting with systemically administered bacteria. Curr. Gene Ther. 10, 3-14 (2010).
- Collins, S. A., et al. Viral vectors in cancer immunotherapy: which vector for which strategy. Curr. Gene Ther. 8, 66-78 (2008).
- Yu, Y. A., Zhang, Q., Szalay, A. A. Establishment and characterization of conditions required for tumor colonization by intravenously delivered bacteria. Biotechnol. Bioeng. 100, 567-578 (2008).
- Baban, C. K., Cronin, M., O’Hanlon, D., O’Sullivan, G. C., Tangney, M. Bacteria as vectors for gene therapy of cancer. Bioeng. Bugs. 1, 385-394 (2010).
- Cronin, M., et al. Orally administered bifidobacteria as vehicles for delivery of agents to systemic tumors. Mol. Ther. 18, 1397-1407 (2010).
- van Pijkeren, J. P., et al. A novel Listeria monocytogenes-based DNA delivery system for cancer gene therapy. Hum. Gene Ther. 21, 405-416 (2010).
- Ahmad, S., et al. Induction of effective antitumor response after mucosal bacterial vector mediated DNA vaccination with endogenous prostate cancer specific antigen. J. Urol. 186, 687-693 (2011).
- Riedel, C. U., et al. Improved luciferase tagging system for Listeria monocytogenes allows real-time monitoring in vivo and in vitro. Appl Environ Microbiol. 73, 3091-3094 (2007).
- Cheng, C. M., et al. Tumor-targeting prodrug-activating bacteria for cancer therapy. Cancer Gene Ther. 15, 393-401 (2008).
- Foucault, M. L., Thomas, L., Goussard, S., Branchini, B. R., Grillot-Courvalin, C. In vivo bioluminescence imaging for the study of intestinal colonization by Escherichia coli in mice. Appl. Environ. Microbiol. 76, 264-274 (2010).
- Collins, S. A., Hiraoka, K., Inagaki, A., Kasahara, N., Tangney, M. PET Imaging For Gene & Cell Therapy. Curr. Gene Ther. , (2012).
- Tangney, M., Francis, K. P. In vivo Optical Imaging in Gene & Cell Therapy. Curr. Gene Ther. , (2012).
