Bioluminescent Bakteriell Imaging<em> In Vivo</em
Summary
Denne artikkelen beskriver administrasjon av<em> Lux-merket</em> Bakterier til mus og påfølgende<em> In vivo</em> Analyse med IVIS Bioluminescens imaging.
Abstract
Denne videoen beskriver bruken av hele kroppen bioluminesce imaging (BLI) for studiet av bakteriell handel levende mus, med vekt på bruk av bakterier i genet og celle terapi for kreft. Bakterier presentere en attraktiv klasse av vektor for kreftbehandling, som har en naturlig evne til å vokse fortrinnsvis innen svulster etter systemisk administrasjon. Bakterier konstruert for å uttrykke lux genet kassett tillatelse BLI påvisning av bakterier og samtidig tumor nettsteder. Plasseringen og nivåer av bakterier i tumorer over tid kan lett undersøkes, visualisert i to eller tre dimensjoner. Metoden er egnet for et bredt spekter av bakteriearter og tumor xenograft typer. Denne artikkelen beskriver protokollen for analyse av selvlysende bakterier i subkutane tumor bærende mus. Visualisering av commensal bakterier i mage-tarmkanalen (GIT) av BLI er også beskrevet. Denne kraftige og billige, real-time imaging strategi representanterts en ideell metode for studiet av bakterier in vivo i forbindelse med kreft forskning, spesielt genterapi og smittsomme sykdommer. Denne videoen beskriver prosedyren for å studere lux-merket E. coli i levende mus, som viser at romlig og tidsmessig avlesning oppnåelig utnytte BLI med IVIS systemet.
Protocol
Discussion
I sammenheng med genterapi, har bruken av biologiske midler for levering av terapeutiske gener til pasienter vist store løftet 3-5. Som virus, det medfødte biologiske egenskapene bakterier muliggjøre effektiv DNA produksjonstid til celler eller vev, særlig i sammenheng med kreft. Det har blitt vist at bakterier er i stand til homing naturlig til svulster når systemisk administrert resulterer i høye nivåer av replikasjon lokalt, enten eksterne for (ikke-invasive arter) eller innenfor tumorceller (patoge…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne ønsker å erkjenne støtte relevant for dette manuskriptet fra EU-kommisjonen sjuende rammeprogram (PIOF-GA-2009-255466) og den irske Health Research Board (HRA_POR/2010/138). Lux-merket E. coli var en slags gave fra Dr. Cormac Gahan, University College Cork.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| 4T1 cell line | ATCC | CRL-2539 | Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor |
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium |
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Phosphate Buffered Saline |
| Xenogen IVIS | Caliper Life Sciences | IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D. | |
| Luria Broth Miller (LB) | Sigma-Aldrich | L2542 | Growth medium for E. coli |
| Erythromycin | Sigma-Aldrich | E5389 | Antibiotic |
| Streptomycin | Sigma-Aldrich | S9137 | Antibiotic |
| MF1nu/nu mice | Harlan (UK) | 069(nu)/070(nu/+) | Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu |
| Balb/c mice | Harlan (UK) | 066 | Haplotype: H-2d |
| Gavage needle | Vet-tech Solutions (UK) | DE009 | 22G x 38mm straight gavage needle |
| Syringe for IV injection | BD BioSciences | 309309 – 1 ml | Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle. |
| Syringe for tumor inoculation | Braun | 9161376V | Omnifix 26 G x ½ inch needle |
References
- Cronin, M., et al. High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting. PLoS One. 7, e30940 (2012).
- Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. Three-dimensional reconstruction of in vivo bioluminescent sources based on multispectral imaging. J. Biomed. Opt. 12, 024007 (2007).
- Tangney, M., Ahmad, S., Collins, S. A., O’Sullivan, G. C. Gene therapy for prostate cancer. Postgrad Med. 122, 166-180 (2010).
- Morrissey, D., O’Sullivan, G. C., Tangney, M. Tumour targeting with systemically administered bacteria. Curr. Gene Ther. 10, 3-14 (2010).
- Collins, S. A., et al. Viral vectors in cancer immunotherapy: which vector for which strategy. Curr. Gene Ther. 8, 66-78 (2008).
- Yu, Y. A., Zhang, Q., Szalay, A. A. Establishment and characterization of conditions required for tumor colonization by intravenously delivered bacteria. Biotechnol. Bioeng. 100, 567-578 (2008).
- Baban, C. K., Cronin, M., O’Hanlon, D., O’Sullivan, G. C., Tangney, M. Bacteria as vectors for gene therapy of cancer. Bioeng. Bugs. 1, 385-394 (2010).
- Cronin, M., et al. Orally administered bifidobacteria as vehicles for delivery of agents to systemic tumors. Mol. Ther. 18, 1397-1407 (2010).
- van Pijkeren, J. P., et al. A novel Listeria monocytogenes-based DNA delivery system for cancer gene therapy. Hum. Gene Ther. 21, 405-416 (2010).
- Ahmad, S., et al. Induction of effective antitumor response after mucosal bacterial vector mediated DNA vaccination with endogenous prostate cancer specific antigen. J. Urol. 186, 687-693 (2011).
- Riedel, C. U., et al. Improved luciferase tagging system for Listeria monocytogenes allows real-time monitoring in vivo and in vitro. Appl Environ Microbiol. 73, 3091-3094 (2007).
- Cheng, C. M., et al. Tumor-targeting prodrug-activating bacteria for cancer therapy. Cancer Gene Ther. 15, 393-401 (2008).
- Foucault, M. L., Thomas, L., Goussard, S., Branchini, B. R., Grillot-Courvalin, C. In vivo bioluminescence imaging for the study of intestinal colonization by Escherichia coli in mice. Appl. Environ. Microbiol. 76, 264-274 (2010).
- Collins, S. A., Hiraoka, K., Inagaki, A., Kasahara, N., Tangney, M. PET Imaging For Gene & Cell Therapy. Curr. Gene Ther. , (2012).
- Tangney, M., Francis, K. P. In vivo Optical Imaging in Gene & Cell Therapy. Curr. Gene Ther. , (2012).
