Summary

血管内灌注的碳黑色墨水可实现可靠的可视化脑血管

Published: January 04, 2013
doi:

Summary

分析啮齿类动物的脑解剖实验中风研究中起着重要的作用。在这方面,一直被认为是血管内灌注有色乳胶作为标准工具数年。然而,这种技术意味着不同的技术限制,破坏了它的可重复性。在这里,我们将介绍一个简单的方法来可视化脑血管在一个可重复的方式。注射液的混合物的两种市售碳黑色油墨通过在足够的填充具有高对比度的可视化的脑血管的左心肌心室结果。我们已经成功地应用这种技术来识别不同的遗传背景的小鼠脑血管领土之间的吻合点。最后,我们提供的证据表明,这种新的和简单的方法,容器染色可与氯化三苯基四氮唑(TTC)染色 – 一种广泛使用的工具,来观察和分析小鼠梗死体积。

Abstract

脑血管的解剖结构的一个重要因素就是对大脑血流动力学以及对缺血损伤的严重程度。脑血管系统动态响应各种病理生理状态与株之间的遗传操作的情况下,它表现出相当大的差异。从本质上讲,一个可靠的颅内血管染色技术研究缺血性中风的发病机制是必不可少的。直到最近,一组不同的技术已被用于可视化的脑血管包括注射低粘度树脂,ARALDITE F,明胶与各种染料1( 胭脂红,印度墨水)或胶乳与2或无3炭黑混合。白乳胶化合物通过升主动脉灌注已报道由科伊尔和Jokelainen 3。 Maeda 等人 2已修改的协议通过添加碳氮化Ň黑色墨盐水灌注后的大脑血管的对比度提高的可视化的胶乳化合物。然而,低效的灌注和船只填充不足经常经历由于高粘度胶乳化合物4。因此,我们已经描述了一个简单的和成本有效的技术,使用的混合物的两种市售碳黑色墨水(CB1和CB2)可视化的脑血管在可重复的方式5。我们已经表明,灌注与CB1 + CB2在小鼠的结果,在胶乳灌注5相比在更高的密度的显着较小的脑血管染色。在这里,我们描述的协议来识别之间的吻合点前(ACA)和大脑中动脉(MCA),研究不同遗传背景的小鼠的血管变化。最后,我们证明了我们的技术可行性相结合,在局灶性脑缺血小鼠模型中CB1 +CB2-介导的血管染色与TTC染色不同程度的缺血性损伤。

Protocol

1。动物根据美国国立卫生研究院的保养和使用实验动物的指导方针进行了实验和地方当局的批准。对于所有的实验中,C57BL6 / J野生型小鼠,载脂蛋白- / – (ApoE基因KO)和SV129小鼠(12-16周龄,体重26-30克,每实验组5-6动物)。 2。彩色乳胶脑血管染色准备为25μl炭黑油墨(茨博士,德国)的混合物用0.5毫升的胶乳化合物(贝碧欧,法国)以1:20的比?…

Representative Results

这里所描述的协议,克服了技术上的限制,传统的乳胶的可视化啮齿类动物的脑血管。 图1A表明,以下的彩色乳胶灌注,大血管的腹侧表面有污渍,使整个背表面不染。的结果也充满变数。只有一个动物,满分6示出在ACA和MCA大脑(数据未示出)的背表面上可见的部分染色。相反,CB1 +的CB2灌注结果以平等的方式( 图1B)的小型和大型船舶在充分填充。染色是稳定的,直到…

Discussion

CB1 + CB2通过人工注射灌注成功地进行了不密集的训练,因为它不涉及任何特定的设备意味着一定的压力2,3。灌注在我们的协议结果的异质性也可以忽略不计。动物的16个非缺血性的动物只有1和3 20缺血性动物显示不完整的灌注。在这种情况下,将泡在盐水灌注导致血管闭塞是最有可能的原因不成功的结果。

虽然灌注胶乳原本进行通过升主动脉2,3,替代路线的?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我们想为她出色的技术援助和马赫什·库马尔特立组织的视频拍摄准备感谢Kaltwasser布丽塔。

Materials

Name of reagent Company Name Catalog No.
Scribtol Schwarz (CB2) Pelican, Germany 221 135
Stempelfarbe (CB1) Herlitz PBS AG, Germany 10417202
Gedeo Latex Pebeo, France 13042B

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Citer Cet Article
Hasan, M. R., Herz, J., Hermann, D. M., Doeppner, T. R. Intravascular Perfusion of Carbon Black Ink Allows Reliable Visualization of Cerebral Vessels. J. Vis. Exp. (71), e4374, doi:10.3791/4374 (2013).

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