<sub> 1</sub> महिला<sub> हे</subSubmitochondrial पुटिका झिल्ली के पैच दबाना रिकॉर्डिंग प्रदर्शन के लिए> ATPase पुटिका तैयारी और तकनीक
Summary
चूहे के मस्तिष्क से F1FO एटीपी synthase परिसरों में समृद्ध submitochondrial पुटिका अलग करने के लिए एक विधि का वर्णन किया है. इन vesicles F1FO ATPase जटिल और पैच दबाना रिकॉर्डिंग की तकनीक का उपयोग कर अपने मॉडुलन की गतिविधि के अध्ययन के लिए अनुमति देते हैं.
Abstract
माइटोकॉन्ड्रिया चयापचय, अस्तित्व 1, विकास और, कैल्शियम 2 संकेत सहित कई महत्वपूर्ण सेलुलर कार्यों में शामिल हैं. सबसे महत्वपूर्ण मितोचोन्द्रिअल कार्यों की दो एटीपी, oxidative phosphorylation के द्वारा सेल की ऊर्जा मुद्रा,, और क्रमादेशित कोशिका मृत्यु 3 के लिए संकेतों की मध्यस्थता के कुशल उत्पादन से संबंधित हैं.
एटीपी के उत्पादन के लिए मुख्य रूप से जिम्मेदार एंजाइम भी एटीपी synthase 4-5 बुलाया F1FO-एटीपी synthase, है. हाल के वर्षों में, apoptotic और परिगलित कोशिका मृत्यु में माइटोकॉन्ड्रिया की भूमिका काफी ध्यान दिया गया है. Apoptotic कोशिका मृत्यु में, इस तरह Bax रूप बीसीएल -2 परिवार प्रोटीन, mitochondrial बाहरी झिल्ली में प्रवेश oligomerize और साइटोसॉल 6 में समर्थक apoptotic कारकों को रिहा, बाहरी झिल्ली permeabilize. क्लासिक परिगलित कोशिका मृत्यु में, इस तरह के न्यूरॉन्स में ischemia या excitotoxicity, एक larg द्वारा उत्पादित के रूप मेंमैट्रिक्स कैल्शियम में ई, खराब विनियमित वृद्धि एक आंतरिक झिल्ली ताकना, mitochondrial पारगम्यता संक्रमण ताकना या MPTP का उद्घाटन करने के लिए योगदान देता है. यह भीतर की झिल्ली depolarizes और बाहरी झिल्ली टूटना, समर्थक apoptotic कारकों की रिहाई, और चयापचय रोग के लिए योगदान, आसमाटिक पारियों कारण बनता है. बीसीएल एक्सएल 7 सहित कई प्रोटीन F1FO एटीपी synthase, नियमन अपने कार्य के साथ बातचीत. बीसीएल एक्सएल F1FO एटीपी synthase बीटा सबयूनिट के साथ सीधे संपर्क रखता है, और इस बातचीत F1FO ATPase गतिविधि 8 के दौरान F1FO द्वारा एच + का शुद्ध परिवहन और जिससे बढ़ती मितोचोन्द्रिअल कार्यकुशलता बढ़ाने, F1FOATPasecomplex भीतर एक दरार चालकता कम हो जाती है. एटीपी synthase गतिविधि और मॉडुलन का अध्ययन करने के लिए, हम F1FO ATPase युक्त कृंतक मस्तिष्क submitochondrial पुटिकाओं (SMVs) से अलग किया. Alavian एट अल के रूप में दिखाया SMVs F1FO ATPase के संरचनात्मक और कार्यात्मक अखंडता बनाए रखने के लिए. यहाँ, हम एक विधि का वर्णनहम चूहे के मस्तिष्क से SMVs के अलगाव के लिए सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया है और हम SMVs की (आयन रिसाव प्रवाहकत्त्व) चैनल गतिविधि का विश्लेषण करने के लिए पैच दबाना तकनीक सीमांकित करते हैं.
Protocol
Representative Results
Discussion
तरीकों में दिखाया के रूप में इस के साथ साथ इस विधि द्वारा phenotypes.SMVspurified सेल के भेदभाव के बिना पूरे दिमाग से चरण 2 के बाद चरण 1 और submitochondrial पुटिकाओं (SMVs) के अंत में अन्य subcellular organelles के द्वारा संदूषण का अनिवार्य रूप से मु?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name | Company | Catalogue number |
| Potter-Elvehjem Tissue Grinder withPTFEPestle | Krackeler Scientific, Inc. | 1-7725T-5 |
| Eppendorf Centrifuge 5424 | Eppendorf | 5424 000.410 |
| 4639 Cell Disruption Vessel | Parr Instrument Company | 4639 |
| Ficoll | Sigma-Aldrich | F5415 |
| Polycarbonate centrifuge tubes | Beckman Coulter | P20314 |
| SW-50.1 rotor | Beckman Coulter | |
| L8-70M Ultracentrifuge | Beckman Coulter | |
| Digitonin | Sigma-Aldrich | D5628 |
| Lubrol PX (C12E9) | Calbiochem | 205534 |
| Axopatch 200B | Axon Instruments | |
| Digidata 1440A | Molecular Device | |
| pClamp10.0 | Molecular Device | |
| Manipulator | Sutter Instrument | |
| Borosilicate glass capillary | World Precision Instruments | 1308325 |
| Flaming/Brown Micropipette Puller Model P-87 | Sutter Instrument |
References
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