In Vivo Imaging Systems (IVIS) Détection d'un neuro-invasive virus encéphalitique
Summary
En utilisant la luciférase et in vivo des systèmes d'imagerie (IVIS) comme un nouveau moyen d'identifier les maladies extrêmes avant de développements cliniques se produire. IVIS nous a permis de visualiser en temps réel l'invasion des virus encéphalitique sur plusieurs jours, en fournissant un modèle de maladie plus précise pour des études futures. Il nous a également permis d'identifier les caractéristiques protecteurs potentiels des antiviraux et des vaccins plus rapidement que les modèles animaux actuellement utilisés. La capacité d'utiliser des animaux individuels sur plusieurs points temporels assure aux besoins des animaux réduits, des coûts et de la morbidité globale pour les animaux utilisés assurer un moyen plus humain et plus scientifique de l'étude des maladies.
Abstract
Avancées modernes dans la technologie d'imagerie encourager le développement et l'affinement de la façon dont la recherche virale est accompli. Initialement proposé par Russel et Burch en 3R Hume (remplacement, réduction, raffinement), l'utilisation de modèles animaux dans la recherche scientifique est sous pression constante afin d'identifier de nouvelles méthodes pour réduire l'utilisation des animaux, tout en améliorant la précision scientifique et de rapidité. Un défi majeur pour les directeurs de Hume cependant, est de savoir comment s'assurer que les études sont exacts, tout en réduisant la morbidité des maladies animales et chiffres globaux. Études sur l'efficacité des vaccins actuellement besoin d'un grand nombre d'animaux afin d'être considéré comme statistiquement significatif et entraînent souvent des taux élevés de morbidité et de mortalité critères d'évaluation pour l'identification de la protection immunitaire. Nous avons utilisé l'imagerie de vivo des systèmes (IVIS) en conjonction avec une enzyme bioluminescente luciole progressivement suivre l'invasion du système nerveux central (SNC) par un riencephalitic virus dans un modèle murin. En général, la maladie progresse relativement lentement, mais la réplication du virus est rapide, en particulier dans le système nerveux central, et peut conduire à une souvent une issue fatale. Suite à l'infection intranasale des souris avec TC83-Luc, une souche atténuée du Venezuela virus de l'encéphalite équine modifié pour exprime un gène de la luciférase, nous sommes en mesure de visualiser la réplication du virus dans le cerveau au moins trois jours avant l'apparition des symptômes cliniques de la maladie. Utilisant invasion du SNC comme un critère clé de la maladie encéphalitique développement, nous sommes en mesure d'identifier rapidement thérapeutique et la protection vaccinale contre TC83-Luc infection avant les symptômes cliniques. Grâce à la technologie IVIS nous sommes en mesure de démontrer le dépistage rapide et précis de la thérapeutique de médicaments et de vaccins, tout en réduisant le nombre d'animaux et la morbidité.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bien que ce protocole couvre les aspects d'imagerie pour l'analyse de vivo, il est important de reconnaître le vecteur bioluminescente comme un facteur clé pour de futures études. Notre utilisation de TC83, une souche vaccinale atténuée de VEEV, comme un vecteur d'expression de la luciférase en sorte que de grandes quantités de l'enzyme sont produites en raison du taux élevé de réplication du virus dans le SNC, comme décrit précédemment 1-4. Bien que l'ajout …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Institut des sciences translationnelle UTMB-NIH 1UL1RR029876-01 et Alisha Prather pour son aide avec le montage vidéo pour ce manuscrit.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| D-Luciferin | |||
| Isoflurane | |||
| Xenogen IVIS System (Spectrum) | Caliper Life Sciences | ||
| XGI-8-gas Anesthesia System | Caliper Life Sciences | ||
| XIC-3 Containment Box | Caliper Life Sciences | ||
| LivingImage 4.0 Software | Caliper Life Sciences | ||
| Telemetry/identification chips | Bio Medic Data Systems | IPTT-300 | Animal ID and Temperature |
| BD Integra 1ml TB syringe with 26 g x 3/8” needle | Fisher Scientific | 305279 | |
| Vet Bond tissue adhesive | Fisher Scientific | NC9259532 | |
| Vetropolycin Ophthalmic Ointment | Webster Veterinary Products | 78444656 | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline 1X | Invitrogen | 14190-144 | |
| BMDS Chip Reader | Bio Medic Data Systems | DAS-7007S | |
| DAS-HOST Software | Bio Medic Data Systems | Used to download probe information |
References
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